
- •Заняття 1 Тема. Правила роботи у бактеріологічній лабораторії. Морфологія бактерій. Світлова мікроскопія з використанням імерсійного об‘єктиву. Прості методи фарбування препаратів
- •Теоретичні питання
- •Практична робота студентів
- •Алгоритм практичної роботи
- •Правила роботи в навчальній бактеріологічній лабораторії на кафедрі мікробіології
- •Демонстрація
- •1 Бактеріологічний посуд: бактеріологічна петля, чашка Петрі, пробірки, градуйовані піпетки, колби
- •2 Предметні та покривні скельця. Скельця з лунками. Спиртівка.
- •3 Мікроскоп. Імерсійна олія
- •4 Пневмококи та менінгококи під мікроскопом
- •Приклади тестових завдань
- •Технологічна карта заняття
- •Додаток а (довідковий) пояснення до самостійної роботи з теми
Демонстрація
1 Бактеріологічний посуд: бактеріологічна петля, чашка Петрі, пробірки, градуйовані піпетки, колби
Бактеріологічна петля для забору мікробного матеріалу при його вивченні виготовляється з платинового або ніхромового (хромонікель) дроту довжиною 8-10см, один кінець якого загнутий у вигляді кола чи овала, другий - закріпляється в спеціальному тримачі, що називається петлетримач.
Скляний посуд широко використовується в мікробіологічній лабораторії як для вирощування мікроорганізмів на поживних середовищах, так і для інших цілей. При використанні для культивування мікроорганізмів посуд попередньо стерилізують. Перед стерилізацією пробірки і колби закривають ватно-марлевими пробками.
2 Предметні та покривні скельця. Скельця з лунками. Спиртівка.
Пісковий годинник, олівець "для скла"
Предметні скельця повинні бути чисто вимиті та знежирені (краплина води на чистому склі легко розтікається по поверхні). Покривні скельця використовують для приготування препаратів „розчавлена” та „висяча” краплі.
Скельця з лунками необхідні при вивченні мікроорганізмів у живому стані методом „висячої” краплі.
Спиртівка використовується для стерилізації в полум'ї бактеріологічної петлі та деяких інших інструментів, фіксації мазків та для фломбування країв пробірок і колб. Посів мікробного матеріалу на живильні середовища, приготування мазків проводяться обов'язково біля полум'я спиртівки.
Пісковий годинник використовується для відліку хвилин при фарбуванні мікроскопічних препаратів.
3 Мікроскоп. Імерсійна олія
Оптична частина мікроскопа складається з об'єктивів, окулярів, а освітлювальна - з конденсора та дзеркала.
Основною характеристикою мікроскопа є його збільшення, яке при даній довжині тубуса дорівнює добутку збільшень об'єктива і окуляра. Наприклад, при використанні імерсійного об'єктива (х 90) і окуляра, який збільшує в 10 разів, зображення об'єкта буде збільшене в 900 разів.
Основною оптичною частиною мікроскопа є об'єктив, який складається із складної центрованої системи лінз, виготовлених з особливого скла різного хімічного складу.
Передня лінза об'єктива, яка дає збільшення, називається фронтальною. Розміщені за нею корекційні лінзи виправляють зображення. Залежно від виправлень аберацій (дефектів зображення оптичних систем) об'єктиви поділяються на ахромати, апохромати і планохромати.
Усунення хроматичної аберації, тобто розкладення білого світла на складові частини спектра, найбільш повно досягається при використанні апохроматів. Це створює умови для більш точнішої передачі забарвлення об'єктивом. За допомогою ахроматів усувається хроматична аберація відносно двох найбільш яскравих кольорів.
Планохромати, тобто об'єктиви з плескатим зображенням, являють собою лінзові ахромати, але більш складної конструкції. При їх застосуванні ліквідується кривизна зображення, оскільки при фокусуванні мікроскопа створюється чіткість контурів об'єкта по всьому полі зору. Паралельно з об'єктивами і сильними ахроматами рекомендується застосовувати компенсаційні окуляри, які дають хроматичну помилку, зворотну остаточному хроматизму об'єктивів, і, таким чином, компенсують його.
Однією з основних характеристик об'єктива є його роздільна здатність, тобто властивість зображувати найдрібніші деталі препарату. Роздільна здатність характеризується найменшою відстанню, при якій дві крапки розрізняють окремо і є в протилежній залежності від довжини хвилі світла.
У сучасних оптичних мікроскопах роздільна здатність об'єктивів становить 0,0002 мм, або 0,2 мкм. При застосуванні сильних об'єктивів (х90) з фокусною відстанню 3-1,5мм необхідно створити однорідне оптичне середовище між фронтальною лінзою об'єктива та препаратом. Це досягається зануренням об'єктива в краплю кедрової олії, яку наносять на препарат. Кедрова олія має показник заломлення (п = 1,51), близький до заломлення скла (1,52). Тому світловий пучок, який проходить через олію, не розсіюється та не змінює свого напряму, а потрапляє до об'єктива, забезпечуючи добре освітлення поля зору. За відсутності кедрової олії промені на межі скло-повітря розсіюються та освітлення буде недостатнім.
Замінник кедрової олії можна використовувати персикову олію (п = 1,49), суміш з однакових об'ємів касторової (п = 1,47) та окропної (п = 1,49) олій, а також "імерсіол", до складу якого входять персикова олія (50г), каніфоль (10г), нафталін (10г), салол (1г).
Рисунок
1
- Хід
променів в імерсійній системі