Алгоритм практичної роботи

Робота № 1

Правила роботи в навчальній бактеріологічній лабораторії на кафедрі мікробіології

Робота на кафедрі мікробіології та в бактеріологічній лабораторії потребує суворого дотримання спеціальних правил, оскільки дослідження проводяться з використанням культур патогенних мікроорганізмів і заразного матеріалу від хворих та експериментальних тварин.

Дотримання цих правил необхідно не тільки для особистої безпеки, але і для безпеки оточуючих нас людей.

1. Всі студенти повинні працювати в медичних халатах, шапочках та змінному взутті.

2. Кожен студент повинен працювати лише на закріпленому за ним робочому місці.

3. Забороняється заходити у навчальні лабораторії в головних уборах та верхньому одязі, класти на столи портфелі та сумки.

4. У приміщенні бактеріологічної лабораторії категорично забороняється курити, вживати їжу, зберігати продукти харчування.

5. На робочому столі повинні знаходитися тільки предмети, необхідні для проведення бактеріологічних досліджень: спиртівка, пастерівські та градуйовані піпетки, пінцети, бактеріологічні петлі, шпатилі, предметні та накривні скельця, пробірки, штативи, чашки Петрі, мікроскоп.

6. Переливати рідини, які містять патогенні мікроорганізми, необхідно над посудиною з дезінфекційним розчином. При набиранні таких рідин у піпетки потрібно користуватися гумовими балонами або грушами.

7. При випадковому потраплянні інфекційного матеріалу на руки, стіл, підлогу та інші поверхні треба негайно повідомити про це викладача і в його присутності провести дезінфекцію заражених ділянок, потім обробити руки дезрозчином і ретельно їх вимити.

8. Оскільки деякі мікроорганізми, особливо спори грибів, є алергенам, не допускається їх розпилення, тому не можна залишати відкритими чашки Петрі, пробірки, колби з культурами мікроорганізмів.

9. У навчальній лабораторії не дозволяються зайві ходіння, різні рухи, непотрібні розмови. Виконання цих вимог попереджує проникання сторонніх мікроорганізмів із повітря і ротової порожнини в досліджуваний матеріал.

10. Після закінчення роботи протерти імерсійний об’єктив мікроскопу, столи дезінфікують, предмети, матеріали, інструменти, інфіковані під час виконання практичної роботи, збирають у бікси для знезараження та дезінфекують руки.

Правила дезінфекції робочого місця:

• зробіть з вати кульку діаметром близько 2 см;

• візьміть кульку пінцетом, змочіть її в дезінфекційному розчині;

• протріть цією кулькою поверхню стола;

• опустіть кульку в посуд з дезінфекційним розчином;

• витріть стіл вологою серветкою.

Правила дезінфекції рук:

• зробіть з вати кульку діаметром близько 2 см;

• візьміть кульку пінцетом, змочіть її в дезінфекційному розчині;

• протріть нею руки в такій послідовності: ліва рука – тильна сторона, долонна сторона, між пальцями, нігтьова пластинка, під нігтями; права рука – у такій же послідовності;

• опустіть кульку в посуд з дезінфекційним розчином;

• візьміть пінцетом другу кульку і все повторіть;

• вимийте руки водою з милом.

Ps! Пам’ятати про те, що студенти несуть відповідальність за мікроскопи, якими користуються, інше лабораторне обладнання, чистоту робочого місця.

Робота № 2

Ретельно вивчити демонстрацію за заняттям, виконуючи усі вимоги зазначені у розділі „Демонстрація”.

Робота №3

Робота з мікроскопом складається з двох основних етапів: 1) правильної установки освітленості поля зору та препарату та 2) мікроскопії препарат різними об‘єктивами.

Пофарбовані препарати бактерій мікроскопуються тільки з використанням імерсійного об'єктива (х90).

Правила роботи з імерсійною системою

1. Підняти конденсор Аббе до рівня предметного столика, повністю відкрити ірис-діафрагму.

2. Користуючись об'єктивом х8 та дивлячись в окуляр, не виймаючи його, за допомогою плескатого дзеркала, досягти максимального освітлення поля зору.

3. На предметному столику розмістити забарвлений препарат стрептококів, нанести на нього кедрову олію і закріпити клемами.

4. Повертаючи револьвер, встановити над препаратом імерсійний об'єктив х90, під контролем зору занурити його в краплю імерсійної (кедрової) олії.

5. Дивлячись в окуляр будь-яким оком (не закриваючи іншого), спочатку макрогвинтом знайти контури зображення, а потім мікрогвинтом досягти максимальної чіткості, вивчити й зарисувати препарат.

6. Після закінчення роботи підняти тубус, зняти предметне скло, обережно витерти серветкою імерсійний об'єктив від кедрової олії, повернути його в бік, опустити тубус.

Препарати замальовуйте кольоровою ручкою, умовно позначивши поле зору у вигляді кола.

Мікроскопічна картина

Зверніть увагу, що стрептококи внаслідок поділу в одній площині формують різної довжини ланцюжки, що нагадують намисто.

Можливі помилки при роботі з мікроскопом

1. Неправильний вибір дзеркальця.

2. Неправильна установка конденсора та ірис-діафрагми, що призводить до недостатньої освітленості об‘єкта.

3. Неправильний вибір об‘єктива для роботи.

4. Неправильна установка револьвера та інше.

Морфологічні та цитологічні особливості клітин мікроорганізмів можна вивчати, використовуючи різноманітні методи мікроскопії, а також використовуючи деякі способи забарвлення. Вибір методів мікроскопічного дослідження і способів забарвлення визначається конкретною метою дослідження. Тобто якщо ми хочемо виявити рухливість, то готуємо препарат "надавлена крапля" чи "висяча крапля", якщо капсули, то зафарбовуємо методом Буррі-Гінса чи Ожешко і т.д.

Догляд за мікроскопом

Мікроскоп необхідно тримати в чистоті та запобігати механічним пошкодженням. При перенесенні його беруть за колонку та підтримують іншою рукою знизу за штатив. Перед початком роботи перевіряють справність мікроскопа. Особливу увагу слід звернути на чистоту оптики. Не слід торкатися руками до поверхні лінз – на них завжди залишаються відбитки пальців. Забруднення лінз окуляра можна виявити рухаючи його під контролем зору. Не слід самостійно розбирати об‘єктиви та регулювати механічні частини.

Після завершення роботи мікроскоп слід привести у порядок. Спеціальною серветкою ретельно протирають олію з імерсійного об‘єктива, переводять револьвер на малий сухий об‘єктив 8х, повністю відкривають діафрагму, трохи опускають конденсор, на предметний столик кладуть серветку для прибирання мікроскопа та опускають тубус мікроскопа максимально вниз. Покривають мікроскоп поліетиленовим чохлом.

Робота 4

Методика приготування мазка з культури, що вирощена на рідкому живильному середовищі

Для приготування мазка необхідно взяти чисте знежирене предметне скло. На предметному склі визначте склографом місце нанесення матеріалу.

Петлю прожарте в полум'ї спиртівки, тримаючи її як олівець вертикально у правій руці. Два-три рази проведіть через полум‘я і нижню третину петлетримача. Не випускаючи петлі, лівою рукою візьміть пробірку з культурою кишкової палички, що вирощена на МПБ. Пробку пробірки притисніть до долоні 4-м та 5-м пальцями, пробірку повільно крутіть колоподібними рухами і витягніть з неї пробку. Вінця пробірки, не випускаючи пробки, проведіть через полум'я, петлю введіть та охолодіть об стінки пробірки. Бактеріальною петлею наберіть краплю культури з рідкого середовиша із дотриманням правил стерильності і обережно, не торкаючись стінок пробірки, вийміть її. Далі проведіть пробку і відкритий край пробірки через полум‘я, після чого її закрийте і поставте у штатив.

Взяту культуру нанесіть на скло і, поступово розтираючи її, приготуйте тонкий, рівномірний мазок округлої чи овальної форми діаметром 1 – 1,5 см.

Після цього петлю прожарте у полум‘ї спиртівки і поставте у штатив.

Висушування мазків. Після приготування мазок висушіть на повітрі при кімнатній температурі або в струї теплого повітря над полум'ям спиртівки (виключаючи сильне нагрівання мазка). Потім висушений мазок зафіксуйте. Фіксований мазок називають препаратом.

Фіксація мазків. При фіксації мазків відбувається загибель мікроорганізмів, вони краще сприймають барвники, ніж живі, і при забарвленні не змиваються. Використовують фізичний (над полум'ям спиртівки) та хімічний (фіксуючими рідинами) способи фіксації.

Фарбування препаратів. При простому методі забарвлення використовують один барвник, наприклад, метиленовий синій, розчин фуксину Пфейфера та ін. Простий метод є орієнтовним і дозволяє виявити мікроорганізми в матеріалі, що мікроскопуються, визначити кількість, форму та взаєморозташування.

Тож, на препарат, що приготовлений з культури кишкової палички, нанесіть фуксин Пфейфера та фарбуйте його 1 – 2 хвилини, після чого барвник змийте водою.

Маркеровка препарату. На предметному склі (зліва) слід вказати дату, назву бактерій або матеріалу, що фарбується.

Дата

Назва

Мікроскопія пофарбованого препарату. Висушений препарат покладіть на предметний столик мікроскопа та нанесіть на нього краплю імерсійної олії. Мікроскопувати пофарбований препарат, дотримуючись всіх правил мікроскопії з використанням імерсійного об‘єктива (див. робота 3).

Препарати замальовуйте кольоровою ручкою, умовно позначивши поле зору у вигляді кола.

Мікроскопічна картина.

Зверніть увагу, що кишкова паличка в препараті розташовується поодинці і зафарбована в рожевий колір.

Робота 5

Методика приготування мазка з культури, що вирощена на щільному живильному середовищі

Для приготування мазка необхідно взяти чисте знежирене предметне скло. На предметному склі визначте склографом місце нанесення матеріалу.

Бактеріальну петлю прожарте у полум‘ї, дотримуючись усіх правил. Не випускаючи петлі, лівою рукою візьміть пробірку із стерильним фізіологічним розчином, а 4-м і 5-м пальцями правої руки затисніть ватно-марлеву пробку, витягніть її і вінця пробірки пронесіть через полум‘я спиртівки, не випускаючи пробки. Петлю введіть у пробірку і охолодіть її, торкаючись стінки. Занурюючи петлю в рідину, наберіть краплю фізіологічного розчину. Вийміть петлю, проведіть пробку та відкритий край пробірки через полум‘я, після чого її закрийте і поставте у штатив. На центр скельця бактеріологічною петлею нанесіть краплю фізіологічного розчину.

Петлю знов простерилізуйте, у ліву руку візьміть пробірку з культурою стафілокока, що вирощена на МПА. Відкрийте пробку із дотриманням усіх правил, охолодіть петлю і наберіть нею невелику кількість культури ковзними рухами. Петлю вийміть, а пробірку закрийте і поставте у штатив.

Взяту культуру стафілокока нанесіть на скло біля краплі фізрозчину, поступово розтираючи його та емульгуючи в краплі. Отриману завісь рівномірно розподіліть на поверхні скла, діаметр мазка повинен бути в межах 1 – 1,5 см. Мазок висушіть на повітрі і зафіксуйте, для цього скло проведіть над полум'ям спиртівки тричі, так щоб мазок був зверху. Препарат пофарбуйте генціанвіолетом (1-2 хвилини). Після закінчення фарбування, змийте барвник водою та висушіть препарат. Препарат мікроскопувати з використанням імерсійного об‘єктива, дотримуючись усіх правил даної мікроскопії (див. роботу 3).

Препарати замальовуйте кольоровими олівцями, умовно позначивши поле зору у вигляді кола.

Мікроскопічна картина.

Зверніть увагу, що стафілокок у препараті розміщується у вигляді скупчень і зафарбований у фіолетовий колір.

Робота № 6

По закінченні роботи необхідно прибрати робоче місце.

Приведіть у належний вигляд мікроскоп. Для цього підніміть тубус, зніміть препарат, витріть олію з об'єктива чистою марлевою серветкою, опустіть конденсор, переведіть револьвер в нейтральне положення і опустіть тубус.

Вилийте воду з ванночки для промивання препаратів.

Поставте пробірки з культурами у загальний штатив.

Наведіть загальний порядок на столі.

Скельця з препаратами, що приготовлені та пофарбовані правильно, залиште для колекції на залікове заняття 1.

Непотрібні використані скельця з препаратами опустіть в посудину з дезрозчином.

Зробіть завершальну дезінфекцію робочого столу (протріть стіл дез. розчином).

Вимийте руки з милом і за необхідності обробіть дез. розчином.

Оформіть протокол практичного заняття. Протокол подати на підпис викладачу після прибирання робочого місця.

Протокол практичної роботи слід оформлювати за такою схемою:

Запишіть поставлене завдання дослідження (воно зазначене у кожній роботі в розділі "Практична робота").

Дайте опис ходу роботи.

Зробіть висновок про кожне проведене дослідження.

При мікроскопічному вивченні препарату результати занесіть до протоколу у вигляді рисунка з повною назвою об'єкта (латиною).