Закінчений табл. З

1	2	3	4	5
Раковий антиген 125 (СА 125) і	Рак яєчника, но­рмальний епіте­лій бронхів пло­ду та дорослої людини	<35 нг/мл	Серозний, ендо- метріальний, сві- тлоклітинний і недиференційо- ваний рак яєчни­ка, аденокарци­нома ендометрія та фаллопієвих труб, кіста яєчни­ка, рак підшлун­кової залози, мат­ки, печінки, ле­гень, деякі незло- якісні стани (вагі­тність, перитоніт, плеврит, ендоме- тріоз)	Специфічність СА 125 неви­сока
Раковий антиген 242 (СА 242)			Рак прямої кишки та підшлункової залози, доброякі­сні гепатобіліарні захворювання	Третій голо­вний маркер раку підшлун­кової залози та прямої кишки
Нейрон- специфіч- на енолаза (НСЕ)	Нейрони, нейро­ендокринні клі­тини нервової системи, клітини нейронного по­ходження, ерит­роцити, тромбо­цити	<12,5 нг/мл	Дрібноклітинний рак легень, ней- робластома, інсу- лома, феохромо- цитома, карци- ноїдні пухлини	Визначається в комбінації з РІА при дріб­ноклітинному раку легень

Системи посилення сигналу ІФА

Розроблено декілька підходів для посилення сигналу і, відповідно, підви­щення чутливості ІФА. Крім того, у ряді випадків можливе зниження втрати антн- гензв'язувальної і ферментативної активності при кон'югації.

Один а таких підходів заснований на застосуванні авідин-біотинової систе­ми (рис. 16).

♦ її ВІЇ* 1ЇЇ ІА.

9

У

1

У V - антитіла

- БСА

Р Р - антиген, що досліджуетьса

• біотин, пов'язаний ферментом

• мічені ферментом антгіла проти

того Ж антигену

Рис. 16. Авідин-біотинова система ІФА

Авідин являє собою глікопротеїн (М.г. - 68 Ша) яєчного білка, що має над­звичайно високу спорідненість із коферментом біотином (М.г. - 244). Таким чи­ном, будь-які речовини, мічені біотином, включаючи й імуноглобуліни, можуть бути виявлені за допомогою авідину, ковалентно або нековалентно пов'язаного з індикаторним ферментом. Крім того, завдяки значно меншому розміру молекули коферменту, у порівнянні з антитілом, імовірність виникнення конформаційних перешкод нижча, ніж при скріпленні антитіл з високомолекулярним ферменїом.

Запропоновано декілька різновидів системи авідин-біотин:

1. Мічений авідин-біотин (МАБ-метод). У цьому випадку речовину, мічену біо­тином, безпосередньо виявляють за взаємодією з авідиновим кон'югантом типу авідин-індикаторний фермент. Потрібно зазначити, що в цьому методі не від­бувається посилення сигналу і в цьому разі можливий високий рівень фону.

2. Ав|дин-біотиновий місток (АБМ-метод). У цьому методі авідин використову­ється в ролі містка між двома або більш молекулами біотинвміщуючого кон'ю- ганта типу біотин-антитіла і біотин-індикаторний фермент. Посилення сиг­налу в цьому випадку можливе завдяки тому, що авідин містигь чотири центри скріплення біотину, що допускає взаємодію комплексу антитіло-авідин відра­зу з декількома молекулами кон'юганта біотин-фермент.

3. Авідин-біотиновий комплекс.

Найбула широкого застосування ще одна система посилення сигналу, а відпо­відно і підвищення чутливості аналізу. Вона заснована на використанні комплексу "пероксидаза - антитіла до пероксидази" (ПАП). Даний метод полягає в попере­дньому зв'язуванні пероксидази і антитіл до пероксидази іп уііго. Після видалення надлишків пероксидази, або антитіл, залишається стабільний циклічний комплекс при фізіологічному рН, що складається з двох молекул імуноглобуліну і трьох мо­лекул пероксидази. Використання даного комплексу як останнього шару в ІФА сприяє помітному посиленню сигналу. Даний комплекс може у цьому разі взаємо­діяти з антивидовими антитілами через імуноглобуліни, що входять до його скла- ду.

Ще одна можливість підвищити чутливість ІФА - застосування каскадних ферментних систем. У цьому випадку перший фермент, пов'язаний з антитілами, приводить до утворення субстрату, що відновлюється, для другої ферментної сис- іеми. Друга ферментна система може бути субстрат-циклічною або редоксициклі- чною. При використанні субстраі-циклічної системи фруктозо-6-фосфат і фрукто- зобіфосфат, що отримані внаслідок першої реакції, слугують субстратом для фос- фофруктокінази і фруктозодифосфатази у другій ферментній системі. Фермент­ними мітками, кон'югованими з антитілами, у цьому випадку можуть бути фосфо- глюкоізомераза або альдолаза. Кінцевий продукт серії реакцій - іони фосфату - ви­значають колоримеїричним методом.

У редоксициклічній системі посилення ферментна мітка (лужна фосфатаза) слугує каталізатором дефосфорилювання НАДФ⁺. НАД⁴', що утворюється при цьому, запускає каталітичний окислювально-відновний НАД⁴ - специфічний цикл