
- •Реферат
- •Введение
- •Обзор и анализ научно технической и патентной информации.
- •Нейтрофины.
- •Общая характеристика.
- •1.2 Нейротрофины в цнс
- •2. Рецепторы нейтрофинов.
- •2.1Высокоаффинный рецептор к нейротрофинам pl40 prototrk
- •2.2 Низкоаффинный рецептор к нейротрофинам p75lntr.
- •Фактор роста нервов.
- •История открытия
- •3.2 Молекулярная характеристика.
- •Третичная структура.
- •3.4 Механизм взаимодействия ngf с рецепторами.
- •3.5 Захват и ретроградный транспорт ngf.
- •3.6 Функции ngf в организме.
- •3.6.1 Действие ngf на нервные клетки.
- •3.6.2 Значение ngf в метаболизме.
- •3.6.3 Участие ngf в патологических состояниях.
- •4. Современные достижения в получении рекомбинантного ngf для фармацевтической индустрии.
- •5 Экспрессия рекомбинантных генов.
- •5.1 Вводная часть.
- •5.2 Конструирование экспрессионных векторов и их функционирование.
- •5.3 Факторы, оказывающие влияние на эффективность экспрессии рекомбинантных генов.
- •6 Выводы по разделу
- •Основная часть
- •1. Материалы, методы и оборудование
- •1.1 Оборудование
- •1.2 Программное обеспечение
- •1.3 Лабораторные посуда и расходные материалы.
- •1.4 Штаммы e.Coli
- •1.5 Среды для выращивания бактерий
- •1.6 Препараты днк
- •1.7 Ферменты
- •1.7 Реактивы и наборы реактивов
- •Приготовление рвs буфера (х10):
- •10% Уксусная кислота
- •1.9.1 Рестрикция
- •1.9.2 Электрофоретичское разделение днк в агарозном геле.
- •1.9.3 Выделение днк из агарозного геля.
- •1.9.4. Полимеразная цепная реакция (пцр).
- •1.9.5 Лигирование.
- •1.9.6 Pipes трансформация клеток e. Coli плазмидной днк
- •1.9.7 Культивирование, выделение и очистка плазмидной днк из клеток e. Coli
- •1.9.8 Проведение пцр-скрининга.
- •1.9.9 Секвенированиеплазмидной днк.
- •1.9.10 Быстрая трансформация.
- •1.9.11 Анализ экспрессии целевого гена.
- •1.9.12 Выделение суммарного (общего) белка из клеток e. Сoli.
- •1.9.14 Фракционирование белков из клеток e. Сoli.
- •1.9.15 Денатурирующий белковый электрофорез в sds-пааг.
- •1.9.16 Отмывка телец включения
- •1.9.17 Растворение телец включения
- •1.9.18 Выделение SumoNgf при помощи металло-хелат-аффинной хроматографии
- •1.9.19 Рефолдинг белка
- •1.9.20 Расщепление гибридного белка SumoNgf
- •2. Экспериментальные исследования
- •2.1 Получение векторных конструкций.
- •2.1.1 Сборка гена ngf методом пцр.
- •2.1.2 Получение векторной конструкции pTngf
- •2.1.3 Получение гибридной последовательности SumoNgf.
- •2.1.4 Получение векторной конструкции pTSumoNgf.
- •2.2 Биосинтез целевого и гибридного белка. Подбор условий культивирования.
- •2.2.1 Биосинтез белка ngf.
- •2.2.1 Биосинтез гибридного белка SumoNgf.
- •2.3 Выделение и очистка рекомбинантного фактора роста нервов человека.
- •2.3.1 Отмывка и растворение телец включения
- •2.3.2 Металло-хелатная аффинная хроматография
- •2.3.3 Масс-спектрометрия гибридного белка ngf
- •2.3.4 Рефолдинг гибридного белка SumoNgf
- •2.3.5 Ферментативное расщепление гибридного белка SumoNgf
- •2.3.5 Очистка ngf на катионобменной хроматографии.
- •2.3.5 Разработка обобщённой схемы производства рекомбинантного ngf
- •Организационно – экономический раздел
- •Технико-экономическое обоснование нир
- •2. Расчёт затрат на научно-исследовательскую работу
- •2.1. Расчет материальных затрат (Cм)
- •2.2. Энергетические затраты.
- •4.2.3. Расчет затрат на заработную плату.
- •2.4. Расчет затрат на стеклянную посуду, стеклянные приборы и пластик.
- •4.2.5. Амортизационные отчисления (Сам.).
- •2.6. Накладные расходы.
- •3 Выводы по разделу
- •Безопасность жизнедеятельности
- •1 Краткая характеристика выполняемой работы.
- •2 Опасные и вредные производственные факторы на основных стадиях выполнения дипломной работы.
- •3 Перечень наиболее опасных мест на стадиях выполнения дипломной работы.
- •Основные физико-химические, токсические и пожаровзрывоопасные свойства используемых в работе веществ.
- •5 Обеспечение безопасности труда в лаборатории.
- •6 Производственная санитария.
- •6.1 Установление категории лабораторного помещения.
- •6.2 Разработка мероприятий по работе с вредными веществами.
- •6.3 Метеорологические условия.
- •6.4 Вентиляция.
- •6.5 Освещение.
- •6.7 Отопление.
- •7 Техника безопасности.
- •7.1 Электробезопасность.
- •7.2 Пожарная профилактика.
- •8. Выводы по разделу.
2.6. Накладные расходы.
Накладные расходы (Сн) включают затраты на содержание учебно-вспомогательного и административно-управленческого персонала, отопление, освещение, вентиляцию, содержание библиотеки, общежития, ремонт зданий и прочие хозяйственные расходы, принимаются в размере 100% от суммы заработной платы с отчислениями.
Сн = (ЗПЛис.+ЗПЛрук) +(ЗПЛрук) ∙0.30
Сн=. 86160 руб.
Смета затрат на проведение дипломной научно-исследовательской работы представлена в таблице 7.
Таблица 7. - Смета затрат на НИР за 10 месяцев.
№ |
Наименование статей затрат |
Сумма, руб.
|
%
|
Примечание
|
||
1 |
Затраты на сырье, материалы, реактивы |
3619,97 |
1,45 |
|
||
2 |
Энергетические затраты по видам: |
|
|
|
||
|
1) затраты на электроэнергию |
17391,38 |
6,99 |
|
||
2) затраты на воду |
24077,60 |
9.67 |
|
|||
Итого затраты на энергию |
41468,98 |
16.66 |
|
|||
3 |
Заработная плата |
|
|
|
||
1) исполнителя |
30000 |
12,05 |
|
|||
2) руководителя |
43200 |
17,36 |
|
|||
Итого ЗПЛ |
73200 |
29,41 |
|
|||
4 |
О.с.н.
|
12960 |
5,2 |
|
||
5 |
Затраты на стеклянные приборы, посуду и пластик. |
19922,16 |
8,0 |
|
||
6 |
Амортизационные отчисления |
11556,62 |
4,64 |
|
||
7 |
Накладные расходы |
86160 |
34,62 |
|
||
Итого
|
248887,73 |
100 |
|
|
3 Выводы по разделу
Общие затраты на выполнение исследовательской работы составили 248887,73 руб.
Анализируя смету затрат на проведение научно-исследовательской работы, можно сделать следующий вывод: наибольший удельный вес в сумме затрат на проведение научно-исследовательской работы приходится на затраты на накладные расходы (34,62%), заработную плату (29,41%) и энергетические затраты (16,66 %). Все данные отображены на рисунке 5.
Рисунок 5 – Распределение затрат на проведение работы по различным статьям расхода.
Все исследования выполнены в течение 10 месяцев. По результатам проведенных в данном разделе расчётов можно сделать вывод о том, что с экономической точки зрения данная работа относится к дорогостоящим проектам и является очень трудоемкой. Несмотря на это использование E. Coli в качестве системы экспрессии выгоднее, чем культуры клеток млекопитающих или растения. Это связано с большим объемом информации о данном организме, а также простоте культивирования, что позволяет удешевить стоимость получаемого белка.
Расходы на исследовательскую работу не могут окупиться за короткие сроки, так как разработка технологии получения рекомбинантного человеческого фактора роста нервов и его внедрение в клиническую практику требует дополнительных экспериментальных исследований, начало которым положено в данной работе.