Вопрос 1.
Мобильные элементы.10-30 генома-повторяющиеся послед-ти, могут перемещаться, как в пределах хромосом, так и между ними. Перемещение путем вырезания, либо копирования (увеличение числа в геноме) 2 типа: транспозоны и ретротранспозоны
1е: огранич инвертированными повторами( последоват, направленными на встречу др др) они нужны для перемещения эл-та, благодаря сближению их др с др и узнаванию транспозазами. Вырезанный транспозон внедряется в район вносимого транспозазой разрыва в кл-мишени и сшивается с ДНК хозяина. Разрыв и сшивание за счет транспозазы и др белков. Транспозаза может кодироваться как самим элементом, так и его копией, которая в отдалении от перемещающегося элемента. В месте страив дуплекация хоз ДНК. Брешь в ДНК после вырезания заделывается с пом гомологич ДНК, либо за счет сшивания разорванных концов. Пример элементов Р-элемент дрозофилы, АС-элем кукурузы.
2е: поведение схоже с ретровирусами. Внедряются в геном путем обратной транскрипции.
1 класс-Содержат тело, 5-8 тыс н.п., огранич прямыми длинными концевыми повторами(ДКП). Не имеют гомологий ни в теле ни в ДКП. Перемещение- транскрипция с пом. Рнк-полимеразы 2.В ДКП имеются сайты инициации транскрипции. ДКП –активные промотеры. Транскрипция начинается в одном ДКП (в левом 5 штрих) , заканчивается в др (правом). Синтезируемая Рнк транслируется с образованием ферментов, необход .для синтеза ДНК и встраивания ее в геном.
Механизм ретротранспозиции.В начале в результате транскрипции ретротранспозона образуется его 140 РНК-копия. Затем последняя транспортируется из ядра в цитоплазму, где при участии обратной транскриптазы используется в качестве матрици для синтеза ДНК-копии мобильного элемента, которая далее переносится в ядро клетки и с помощью интегразы встраивается в новый участок ДНК. Таким образом, посредством ретротранспозиции данные мобильные элементы распространяются по геному.
2 класс ретротр - ретротрансп не несущие ДКП.к ним отосится представители сем-ва L1 , населяющие геном человека. Внедряются в геном с пом. Обратной транскрипции. Репликация
Перемещение МГЭ - ричина спонтанных мутаций. Если эл-т встроился в интрон – ничего не будет. В случае, когда интрон не вырезается, может быть мутация. Если встроился в экзон – белок или не синтезируется, или синтезируется ненормальный. Если встроился в энхансеры-нарушение регуляции. В промотер – промотер не работает.
При перемещении МГЭ могут происходить хромосомные перестройки, горизонтальный перенос генов.
Примеры: встроился МГЭ – в слюнных железах стала выраб амилаза, до этого только в поджелудочной вырабатывалась.
24.
Вопрос 1.
Рестрикция (расщепление ДНК) достигается с пом. Эндонуклеаз бактериального происхождения- рестриктаз. Они способны осущ разрывы межнуклеотидных (фосфодиэфирных) связей внутри цепи ДНК.
В генетич. Инженерии используются для фрагментации ДНК и создания рекомбинантных геномов.
Основа для классиф – характер их воздействия на ДНК и зависимость от кофакторов.
Различают несколько типов рестриктаз:
• рестриктазы первого типа
Содержат 3 неидентичных субъединицы. В качестве кофакторов магний, АТФ и аденозилметионин. Специфичны к неметилированной 2ой ДНК.узнают определённую последовательность нуклеотидов и разрезают двухцепочную молекулу ДНК неподалёку от нее в произвольной точке;
• рестриктазы второго типа состоят из двух субъединиц одного вида. Для осущ нуклеазной активности нуждаются в ионах магния.узнают определённую последовательность и разрезают ДНК в фиксированной точке внутри этой последовательности. Гидролизуют фофодиэфирные связи в 2х цепях ДНК. Рестриктазы этого класса распознают в большинстве случаев палиндромные после-довательности (ОСУЩ СИМЕТРИЧНЫЕ ИЛИ НЕСИМЕТРИЧНЫЕ разрывы в зоне палиндрома), состоящие обычно из 4-8 нуклеотидов;
• рестриктазы третьего типа из 2х типов субъед (рестриктазы и метилазы) узнают асимметричные последовательности и разрезают ДНК, отступив определённое число нуклеотидных пар от её конца (или в нескольких точках на разном удалении от сайта узнавания).