- •Учреждение образования «Гомельский Государственный медицинский университет» Кафедра микробиологии, вирусологии, иммунологии
- •Энтерококки
- •Микробиологическая диагностика пневмококковых инфекций
- •Микробиологическая диагностика менингококковой инфекции
- •Биохимическая дифференциация менингококка и гонококка
- •Микробиологическая диагностика гонококковой инфекции
- •Эшерихии
- •Общая характеристика диареегенных эшерихий
- •3 День Серотипирование выделенной культуры:
- •4 День Определение спектра антибиотикорезистентности выделенной культуры
- •2 День
- •3 День. Учет биохимических свойств на среде Клиглера
- •Микробиологическая диагностика заболеваний, вызываемых протеями
- •2. Реакции Райта в серодиагностике бруцеллеза
- •Биохимические свойства видов рода Haemophilus
- •Признаки дифференциации видов актиномицетов
- •Биохимические свойства Listeria monocytogenes
- •Основные морфологические признаки патогенных спирохет
- •Лабораторная диагоностика боррелиозов
- •Лабораторная диагностика лептоспироза
- •Трепонематозы
- •Лабораторная диагностика сифилиса
- •Скрининг (отборочные реакции)
- •Подтверждающие (диагностические) реакции
- •Лабораторная диагностика кампилобактериоза
- •Лабораторная диагностика хеликобактериоза
- •1. Реакция агглютинации (рар)
- •2. Рнга
- •Хламидии классификация представителей семейства chlamydiaceae и вызываемые ими заболевания
- •3. Серодиагностика (реакции)
- •Микоплазмы
- •1. Для экспресс-диагностики используют:
- •2. Вирусологический метод
- •Вирусологический метод (схема)
- •1) Куриный эмбрион (кэ)
- •2) Культура клеток
- •2. Феномен гемадсорбции (рГадс)
- •3. Образование бляшек - феномен Дюльбекко
- •4. Феномен интерференции
- •3) Лабораторные животные
- •3. Серологический метод.
- •5 Этап. Идентификация (серотипирование) вируса в рск и/или в ртга.
- •3. Серодиагностика гриппа с помощью ртга
- •Герпесвирусы
- •Общая характеристика семейства Herpesviridae
- •Сравнительная характеристика энтеровирусов *
- •I. Вирусологический метод
- •4 Этап. Титрование вируса для выбора рабочей дозы перед постановкой реакции нейтрализации.
- •1. Рн с поливалентной сывороткой.
- •2. Рн с моновалентными сыворотками.
- •II. Серодиагностика
- •I.Экспресс - диагностика
- •II. Вирусологический метод
- •III.Серодиагностика
- •1.Обнаружение антигена вируса клещевого энцефалита в рнга
- •2. Вирусологический метод
- •3. Серодиагностика клещевого энцефалита в ртга
- •Характеристика грибов
- •3. Определение чувствительности выделенной культуры к антимикотикам диско-диффузионным методом.
1) Куриный эмбрион (кэ)
Обозначьте на рис. структурные элементы КЭ:
а) хорионаллантоисная оболочка;
б) аллантоисная полость;
в) амнион;
г) желточный мешок.
Методы заражения куриных эмбрионов:
|
|
Феномены, позволяющие выявить вирус в курином эмбрионе: |
|
РГА с аллантоисной жидкостью куриных эмбрионов, зараженных вирусом гриппа
Принцип метода _______________________________________________________________________________
Исследуемый материал _________________________________________________________________________
Дополнительные ингредиенты реакции ____________________________________________________________
Разведение вируса |
1/2 |
1/4 |
1/8 |
1/16 |
1/32 |
1/64 |
Контроль эритроцитов |
1 кап. взвеси КЭ |
|||||||
Результат |
|
|
|
|
|
|
|
Вывод: _______________________________________________________________________________________
2) Культура клеток
Первичные культуры клеток |
Перевиваемые культуры клеток |
Это клетки различного типа (почек обезьян, почек эмбриона человека, амниона человека, куриных эмбрионов). Срок жизни таких культур ограничен ≤ 10 пересевами. Лишь отдельные группы клеток первичных культур могут сохранить способность к росту и размножению и при многократных пересевах они дают начало перевиваемым культурам клеток. |
Перевиваемые клеточные линиии характеризуются потенциальным бессмертием и гетероплоидным набором хромосом. Наиболее часто применяются такие линии перевиваемых клеток как RH - из почки человека; ВНК-21 - из почек однодневных сирийских хомяков; ПМС - из почки морской свинки, Vero – из почек зеленой мартышки и др. Полуперевиваемые культуры клеток (диплоидные) - клетки одного типа, способные in vitro выдерживать максимум 50 пассажей, сохраняя при этом свою исходную морфологию и диплоидный набор хромосом. |
Питательные среды и солевые растворы для культур
- Буферные солевые растворы применяются для промывки тканей и клеток в процессе приготовления клеточных культур и для приготовления питательных сред.
- Питательные среды по своему назначению делятся на ростовые и поддерживающие.
Широкое применение находят синтетические стандартные питательные среды, например, синтетическая среда 199 и среда Игла. Независимо от назначения все питательные среды для культур клеток конструируются на основе сбалансированного солевого раствора. Чаще всего им является раствор Хенкса. В состав ростовых сред входит сыворотка крови животных.
Выделение вирусов и методы их индикации в культуре клеток
Для заражения используются чувствительные к данному вирусу культуры с хорошо развитым монослоем клеток, находящиеся в пробирках (флаконах).
Перед заражением клеток питательную среду удаляют и в каждую пробирку (лунку планшета или флакон) вносят по 0,1-0,2мл взвеси испытуемого материала, предварительно обработанного антибиотиками. После 30 - 60 мин. контакта вируса с клетками удаляют избыток материала, вносят по 1,0 - 1,5мл на пробирку поддерживающей среды и оставляют в термостате до выявления признаков репродукции вирусов.
ФЕНОМЕНЫ, ПОЗВОЛЯЮЩИЕ ВЫЯВИТЬ ВИРУС В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК
1. Цитопатический эффект (действие) – (ЦПЭ или ЦПД), который является следствием поражения клеток под действием размножающегося в них вируса.
ЦПД может быть трех основных типов:
а) кругло- или мелкоклеточная дегенерация;
б) образование гигантских многоядерных клеток - симпластообразование;
в) образование внутриядерных или цитоплазматических включений вирусспецифических или неспецифических.