Теоретические вопросы:

1. Регуляция содержания глюкозы крови в норме.

2. Гипер- и гипоглюкоземии при патологических состояниях.

Ориентировочная основа деятельности студентов для проведения лабораторной работы:

Работа №1. Определение содержания глюкозы в крови глюкозооксидазным методом

Принцип метода. Ферментативный метод определения глюкозы основан на действии глюкозооксидазы и предназначен для специфического определения глюкозы в биологических жидкостях в присутствии различных сахаров и других редуцирующих веществ неуглеводной природы. Глюкозооксидаза (КФ 1.1.3.4) относится к флавопротеинам (кофермент – ФАД). Глюкоза окисляется при действии фермента с образованием Н₂О₂ и глюконата. Возникшую перекись водорода определяют реакцией, катализируемой ферментом пероксидазой, с последующим окислительным азосочетанием производного фенола с 4-аминофеназоном (хромогенный кислородный акцептор). В ходе реакции образуются окрашенные в розовый цвет продукты. Количественное определение глюкозы заключается в измерении интенсивности окраски красителя и сравнении оптической плотности испытуемой пробы с окраской калибровочного раствора глюкозы.

Порядок выполнения работы:

1). В пробирку №1 (опыт) вносят 0,01 мл сыворотки крови и 1 мл рабочего раствора

(ферментно - хромогенная смесь)

2). В пробирку №2 (контроль) вносят 0,01 мл стандартного раствора глюкозы

(концентрация глюкозы 10 ммоль/л) и 1 мл рабочего раствора

3) Пробирки перемешивают и инкубируют в термостате 30 минут при 37^оС

4) Измеряют оптическую плотность опытной пробы (А_опыта) и контроля (А_{контроля})

на ФЭКе против Н₂О _дистил при длине волны 540 нм

5) Рассчитывают содержание глюкозы по формуле:

Глюкоза (ммоль/л) = (10×А_опыта) : А_{контроля}

В выводах сопоставить величины нормального содержанию глюкозы в крови с данными, полученными в результате проделанной работы.

Клинико-диагностическое значение. Благодаря существованию сложных регуляторных механизмов, концентрация глюкозы в крови сохраняется относительно постоянной – 3.3-5.5 ммоль/л. Концентрация глюкозы в крови зависит от строгой регуляции интенсивности процессов распада и синтеза гликогена, глюконеогенеза, скорости всасывания глюкозы в ЖКТ и окисления ее в тканях с высвобождением энергии.

Гипогликемия – понижение содержания глюкозы в крови. Гипогликемия наблюдается при длительном голодании; сопровождает заболевания поджелудочной железы, опухолевый рост, тяжелые поражения печени, эндокринные нарушения; наблюдается при передозировке инсулина. При гипогликемии ниже 2.7 ммоль/л возникает риск развития гипогликемической комы.

Гипергликемия – повышенное содержание глюкозы в крови (более 6 ммоль/л). Физиологическая гипергликемия наблюдается после приема пищи, при эмоциональном стрессе. Гипергликемия сопровождает эндокринные нарушения (сахарный диабет, гипертиреоз), острый и хронический панкреатиты, заболевания печени, сердечно-сосудистые заболевания и др. При гипергликемии выше 22 ммоль/л развивается гипергликемическая кома.

Работа № 2. Определение глюкозы в моче с помощью глюкотеста

Принцип метода. Метод основан на каталитическом действии глюкозооксидазы и предназначен для экспресс-анализа глюкозы в моче. Глюкозооксидаза, пероксидаза и растворы красителей иммобилизованы на полосках бумаги (тест-полоски). Изменение окраски красителя при его окислении будет свидетельствовать о наличии глюкозы в моче. При помощи глюкотеста можно определить концентрацию глюкозы в моче от 0.1 до 2%.

Порядок выполнения работ:

1. Наливают в стаканчик небольшое количество исследуемой мочи.

2. Извлекают из пенала тест-полоску. (Осторожно! Не трогать руками конец полоски, пропитанный реактивами. Не допускать попадание влаги в пенал!)

3. Погружают тест-полоску в мочу

4. Немедленно извлекают тест-полоску из жидкости, кладут на чашку Петри

(или предметное стекло) и выдерживают 2 минуты

5. Сравнивают изменившуюся окраску тест-полоски с цветовой шкалой, представленной на пенале.

6. При отсутствии глюкозы цвет тест-полоски не изменяется

7. Находят наибольшее совпадение цвета тест-полоски с цветом на шкале и ориентировочно определяют концентрацию глюкозы в процентах (ммоль/л)

Клинико-диагностическое значение. В моче здорового человека глюкоза содержится в очень малых количествах и обычными реакциями не обнаруживается. Явление, когда глюкоза в моче определяется обычными методами, называется глюкозурией.

Глюкозурия может быть следствием гипергликемии, когда концентрация глюкозы в крови превышает почечный порог (8 – 10 ммоль/л) и может быть обусловлена физиологическими причинами (алиментарный фактор, беременность, стресс) или патологией (сахарный диабет, гипертиреоз, острый панкреатит и др.). Обнаружение глюкозы в моче при нормогликемии свидетельствует о нарушении реабсорбции глюкозы в почечных канальцах (патология почек).