13.4.В чому полягають основні методичні прийоми при типуванні вірусів в рн у біологічних системах.

• ^{Типирование вирусов в РН}

• При постановке РН с целью типирования ^{выделеленного вируса, его используют в} дозе 100 ТЦД50/мл (100 ЛД50).

• Диагностические сыворотки используют в рабочих разведениях не менее 20 нейтрализующих единиц в одинаковых объемах жидкости.

• Готовят серийные двукратные разведения диагностической сыворотки в ПС

• От 2^-1 (1:2) до 2^-5 (1:32) в 1 мл

• Готовят суспензию выделенного вируса в инфекционной дозе 100 ЛД₅₀ в 1 мл ПС

• Диагностическую сыворотку в соответствующем разведении вводят во взаимодействие с равным объемов вируса в дозе 100 ЛД₅₀

• Смесь инкубируют(1 ч при 37 ос) для образования комплекса АГ-АТ

• ^{Начиная с образца с наименьшим разведением сыворотки, смеси наносят на отмытые культуры клеток или вводят лабораторным животным (КЭ)(по 4 тест-объекта на каждую смесь)}

• ^{Контроли (по 4 тест-объекта) :}

• ^{К дозы вируса (ЛД50);}

• ^{К манипуляции (ФР)}

• ^{К токсичности сыворотки}

• ^{За живыми системами наблюдают в течение 5-21 дня}

• ^{Результат РН считеют положительным, если в группах животных (КК, КЭ), получивших смесь сыворотки и 100 ЛД}₅₀ ^{вируса объекты выживут или не заболеют}

• ^{Серотип выделенного вируса определяется типом сыворотки, нейтрализующей 100 ТЦД50 или 100 ЛД50 этого вируса.}

• ^{Если диагностируемый вид вируса представлен большим количеством серотипов (например Коксаки А, В), для постановки РН используют смеси известных сывороток или поливалентные сыворотки}

13.5.Визначення віруліцидної дії дезінфікуючих засобів суспензійним методом.

Суспензійний метод

1. Дозволяє забезпечити контакт досліджуваного дезінфекційного засобу з концентрованим вірусовмісним матеріалом у рідкому середовищі

2. Надає можливість моделювання дезінфекції біологічних рідин (варіант з білковим навантаженням);

3. Відносно безпечний при виконанні для персоналу лабораторії

4. Не застосовується при відсутності прийнятних способів припинення дії дезінфектанту після завершення експозиції з вірусовмісною рідиною.

Виконання суспензійного методу

1. Змішують рівні об'єми вірусовмісної рідини (з відповідним інфекційним титром тест-вірусу в ній) та досліджуваного дезінфекційного засобу, кінцева концентрація якого в розчині в 2 рази перевищує ту, що вказано в інструкції по застосуванню.

2. Час експозиції в даному тесті становить 1 хвилину або 30 секунд, якщо в інструкції виробником не передбачено інакше.

3. Після завершення експозиції до суміші вірус - дезінфектант додають рівну кількість розчину нейтралізатору і витримують 5 хв.

Виконання суспензійного методу

4. Після завершення заданих експозицій готують послідовні десятиразові серійні розведення одержаних дослідних і контрольних проб у підтримуючому живильному середовищі від 10^-1 до 10^-4.

5. Титр вірусу в них (залишкову інфекційну активність тест-вірусу) визначають стандартним методом

6. Контроль: контрольну пробу готують паралельно з дослідною, використовуючи замість дезінфекційного засобу стерильну дистильовану воду.

Критерії оцінки

• Загальну віруліцидну ефективність розраховують як різницю між титром вірусу в присутності дезінфектанту і його титром в присутності розчинника:

• Е=т_к - т_д , де

• Е – загальна віруліцидна ефективність;

• Т_к – титр вірусу в контролі;

• Т_д – титр вірусу в суміші вірус/дезінфектант.

Результат

Рзультат випробування віруліцидної дії дезінфекційного засобу по відношенню до відповідного тест-вірусу вважається позитивним, якщо досягається зменшення інфекційного титру тест-вірусу не менше ніж на 4.0 lg тцд₅₀/мл в порівнянні з контролем

Білет 14