37.Забарвлення зрізів.Барвники основні,нейтральні.Техніка забарвлення зрізів.

Розрізняють методи забарвлення для оглядових цілей, які застосовуються для отримання загального уявлення про морфологію тканини або органу, і спеціальні, призначені для виявлення певних елементів клітини або тканини (наприклад, комплексу Гольджі, мітохондрій, еластичних волокон сполучної тканини і т. д.). Нижче розглядаються лише деякі методи фарбування для оглядових цілей. Суть їх зазвичай полягає в тому, що при цьому забарвлюються ядра і якимось контрастним барвником - цітоплазма.Кіслие барвники. Ці барвники не є вибірково цитоплазматичними. Барвники для цитоплазми підбирають таким чином, щоб їх колір добре контрастував із забарвленням ядер.Для до фарбування цитоплазми після фарбування ядер гематоксиліном найчастіше використовується 1% водний розчин еозину. Для зрізів, забарвлених карміном, використовують розчин пікринової кислоти, отриманий шляхом розведення водою насиченого розчину пікринової кислоти у відношенні 1:3 (при кімнатній температурі в 100 мл води розчиняється приблизно 1,2 г пікринової кислоти, отже, для отримання насиченого розчину слід взяти трохи більше цієї кількості пікринової кислоти). Час фарбування 2-5 хв. Цитоплазма клітин і еритроцитів фарбуються в жовтий цвет.Ядерние (основні) барвники. для фарбування ядер використовуються гематоксилін, кармін, сафраніна та інші основні барвники. Існує кілька способів приготування розчинів гематоксилін.Найбільш поширеним є гематоксилін Ерліха.

38.Оформлення зрізів у заключні середовища

Парафінові зрізи, пофарбовані жиророзчинними барвниками. Для виявлення деяких ліпідів, які не вимиваються з тканин при зневодненні, просвітління, заливці, депарафінірованіі і перенесення в воду, зрізи слід укладати в середовища, в яких жири та барвники не розчиняються. Для цього достатньо видаляти надлишкову иоду та укласти зрізи в гума-сироп, гліхрогель, гліцерин - желатин Після просвітління в ксилолі забарвлених звичайними методами зрізів їх укладають переважно у смоли. Раніше як середовищ для укладення використовували розчини канадського бальзаму або даммаровой смоли, згущеного кедрового масла, еупараля та ін в ксилолі і хлороформі. В канадський бальзам зрізи укладають після фарбування гематоксиліном або еозином. Для укладення зрізів, забарвлених аніліновим синім і кислотним фуксином, Кертіс запропонував підкислити бальзам саліцилової кислотою. Частина розчину бальзаму в ксилолі розбавляють до консистенції рідкого сиропу, насичують кристалами саліцилової кислоти, фільтрують через фільтрувальний папір і змішують з рівним об'ємом вихідного розчину. Бели розчин пересичений, в препаратах часто виступають кристали саліцилової кислоти. Всі перераховані вище смоли непридатні для укладення зрізів, забарвлених за методом Романовського, так як синій компонент барвника в цьому середовищі поступово вицвітає. В цьому випадку краще всього використовувати для укладення важке мінеральне масло, а препарати обкантовувати желатином або нітроцелюлозним клеєм. Через якийсь час масло випливає і забруднює препарати, але їх легко очистити; в таких препаратах забарвлення зберігається в хорошому стані протягом 20 років.Ланжерон рекомендує обкантовувати препарати смолою по апатії. Висновок в смоли і сиропи здійснюють наступним чином. Підбирають покривні скла відповідних розмірів, щоб вони закривали зрізи.На покривне скло по центру наносять краплю або, якщо скло довге, дві краплі рідкого розчину смоли в ксилолі. Покривне скло поміщають краплею вгору на фільтрувальний папір. Якщо зрізи укладають в розчини смол в ксилолі, одночасно можна підготувати до 6 покривних стекол, але для укладення заморожених зрізів в сироп краще готувати по одному склу. Предметне скло з пофарбованим зрізом виймають з ксилолу або води (залежно від проводки), підсушують і тримають його похило зрізом вниз над покривним склом, так щоб один його довгий кінець стосувався фільтрувального паперу поряд з покривним склом. Потім предметне скло обережно опускають, поки зріз не торкнеться краплі розчину смоли або сиропу на покривному склі. Крапля розтікається до країв покривного скла. Якщо під покривне скло потрапляють бульбашки повітря, їх можна видалити, обережно натискаючи на покривне скло кінчиком препарувальною голки або злегка піднімаючи один його край, іноді достатньо просто додати смоли або сиропу. Потім дають стекти надлишку смоли, тримаючи предметне скло зрізом вниз під кутом близько 30 °, і, притискаючи до нього покривне скло, обсушують його краю фільтрувальним папером. Після цього препарати поміщають на планшет і ставлять у тепле місце для сушіння. Краї покривного скла не слід витирати ватою або марлею, змоченою ксилолом, так як при цьому частина смоли може розтектися по чистій поверхні покривного скла.Засихаючи, вона утворює нерівності, які заважають спостереженню під мікроскопом і від яких дуже важко позбутися. Якщо зрізи укладають в трікапрат целюлози, то надлишок його засихає по краях покривного скла у вигляді маленьких твердих кульок, які легко зрізати маленьким ножем або зняти нігтем. При укладанні великих зрізів для топографічного вивчення, наприклад, молочної залози, великих півкуль мозку, кісток людини і т. п. між зрізом і покривним склом вже після укладення часто накопичується повітря. Щоб уникнути цього рекомендується використовувати більш концентровані розчини смол, які нагрівають для зменшення в'язкості. Полістироли не підходять для цієї мети, оскільки їх розчини мають велику в'язкість при порівняно низьких концентраціях. Більш зручні канадський бальзам, нейтральні ефірні смоли і деякі цикло-парафінові і терпенові смоли; зрізи можна укладати в злегка нагріті 60-80%-і розчини цих речовин в ксилолі. В результаті неповного зневоднення в забарвлених ув'язнених препаратах часто утворюються непрозорі або каламутні зони. Під мікроскопом в такій ділянці зрізу і над ним виявляються численні дрібні крапельки води, забарвлення сильно вицвітає. Щоб позбутися цього, знімають покривне скло, змивають ксилолом синтетичну смолу або бальзам, зневоднюють зріз в 100%-ном спирті, ацетоні або ізопропиловому спирті, прояснюють в суміші ксилолу з зневоднюються агентом і в 2-3 змінах свіжого ксилолу і знову укладають.