Холерный вибрион

Холеру вызывают Vibrio cholerae, выделенный Р. Кохом в Египте (1883), и Vibrio eltor, полученный Ф. Готшлихом на карантинной станции Эль–Тор в Северной Африке (1906).

Клиника и эпидемиология холеры. Холера (букв: желчеистечение) – острая кишечная, особо опасная инфекция, сопровождающаяся резким обезвоживанием и обессоливанием организма. В развитии болезни различают три периода: 1) холерный энтерит, или холерный понос, продолжительностью 1–2 суток; 2) холерный гастроэнтерит – обильный понос и многократная рвота, уменьшение диуреза, появление судорог; 3) холерный алгид – резкое снижение температуры, цианоз, глубокое нарушение водно–солевого обмена (дряблость кожи, охриплость голоса), ослабление сердечной деятельности. При благоприятном течении цикличность проявления холеры прерывается и наступает выздоровление, а в тяжелых случаях вслед за алгидом развивается асфиксия, заканчивающаяся смертью. Возможны легкие и тяжелейшие формы инфекции, например сухая холера, которая при отсутствии поноса и рвоты в результате резкой интоксикации дает летальный исход в течение 12– 24 ч.

Источником инфекции является человек – больной и бактерионоситель. Механизм передачи – фекально–оральный. Заболевают люди разных возрастов, но особенно восприимчивы к холере дети и старики.

Рис 36. Холерный вибрион

Биологические особенности возбудителя холеры. Морфология. Холерные вибрионы имеют форму тонких, изогнутых в виде запятой палочек размерами 3,0х0,3 мкм, с полярно расположенным жгутиком. От других жгутиковых бактерий вибрионы–монотрихи отличаются очень активной подвижностью, которую даже сравнивают с «полетом ласточки». Спор и капсул не образуют. В мазках из культур и фекалий располагаются в виде «стайки рыб». Хорошо красятся водным фуксином, грамотрицательны (рис. 36).

Культуральные свойства. Холерный вибрион растет при температуре 35–37°С. Это самый непритязательный к питательным веществам щелочелюбивый микроб. Для его выделения используют 1% щелочную пептонную воду, щелочной мясопептонный агар и много других элективных и дифференциально–диагностических сред с рН 7,8–8,6. В 1% пептонной воде вибрион вырастает через 6–8 ч в виде нежной пленки. На плотных средах образует колонии через 16–24 ч, в частности на мясопептонном агаре – дисковидные, выпуклые, с голубоватым оттенком, на японском бактоагаре TCBS (89 г тиосульфат–цитрат–бромтимол–сахарозы на 1 л воды) – крупные, плоские, желтые.

Биохимическая активность. Холерные вибрионы расщепляют маннозу, сахарозу, но не ферментируют арабинозу, через 6 ч разлагают крахмал, с большим постоянством ферментируют лактозу, свертывают молоко, образуют индол и разжижают желатину.

Антигены. Возбудитель холеры имеет соматический О– и жгутиковый Н–антигены. Классический биовар и биовар эльтор агглютинируются холерной О1–сывороткой. Внутри каждого биовара выделяют серовары Инаба, Огава и Гикошима. Для их дифференциации используются агглютинирующие сыворотки Инаба и Огава.

Токсины. Холерный вибрион образует два типа токсинов. Токсин первого типа освобождается при автолизе клеток и представляет собой эндотоксин. Токсин второго типа является экзотоксином и состоит из двух фракций: холерогена (энтеротоксин), нарушающего водно–солевой обмен, и цитотоксина, оказывающего цитотоксическое действие на клетки.

Исследованию подлежат: 1) испражнения и рвотные массы больных; 2) фекалии реконвалесцентов, получаемые после дачи им 20–30 г магния сульфата; 3) фекалии здоровых вибриононосителей, взятые тампоном из прямой кишки; 4) отрезки тонкой кишки и желчный пузырь с частью печени; 5) вода (1 л) и пищевые продукты (около 200 г).

Все материалы отбирают в чистую посуду, в которой не должно быть даже следов дезинфицирующих средств. Их необходимо исследовать в ближайшие 3 ч с момента взятия.

Лабораторная диагностика. Основным в лабораторной диагностике холеры является: 1) обнаружение в мазках из испражнений изогнутых тонких грамотрицательных палочек, располагающихся в виде «стайки рыб»; 2) активная подвижность вибрионов в раздавленной капле; 3) мгновенная их иммобилизация при добавлении 0–холерной сыворотки; 4) образование голубоватой пленки–паутинки на пептонной воде через 5–6 ч и характерных колоний–росинок на щелочном МПА (12 ч); 5) агглютинабельность вибрионов в противохолерных сыворотках и их лизабельность типовыми холерными фагами С и Эль–Тор.

Схема бактериологического исследования. Так как окончательные результаты должны быть выданы через 30–36 ч, то исследование проводится круглосуточно.

I этап. Из испражнений и рвотных масс готовят мазки, высушивают на воздухе, фиксируют смесью Никифорова и окрашивают водным фуксином или по Граму. Параллельно с этим изучается подвижность вибриона в раздавленной капле. Одновременно испражнения высевают на 1% щелочную пептонную воду, щелочной мясопептонный агар и TCBS. Все посевы помещают в термостат при температуре 37°С. Дают первое заключение о наличии в материале вибрионов.

II этап. Через 5–6 ч инкубации в термостате на пептонной воде вырастает едва видимая пленка, из которой делают мазки, препараты раздавленной капли. Пленку агглютинируют в капле О–холерной сыворотки и выдают второе заключение о природе выделенного вибриона. Пленки пересевают на вторую пептонную воду и щелочной МПА.

III этап. Спустя 12–16 ч от момента посева на среды испражнений больного представляется возможность повторно изучить морфологию, •подвижность и агглютинабельность вибрионов пленки, выросшей на второй пептонной воде, а также провести те же исследования, отобрав с плотных сред подозрительные колонии.

Определив, что колонии состоят из вибрионов, агглютинирующихся в О–холерной сыворотке, разведенной 1:100, и в одной из типовых сывороток Инаба и Огава, разведенных 1:50, дают третье заключение о результатах исследования. Подозрительные колонии пересевают на скошенный агар для накопления культуры и определения ферментативных свойств.

IV этап. Установив, какие ферменты продуцирует культура вибриона на ряде Гисса, определяют ее чувствительность к холерным фагам и дают окончательное заключение.