Реакция преципитации

Рис. 30. Реакция преципитации:

а – реакция Асколи:

1– опыт; 2– контроль; б – реакция Оухтерлони: 1– иммунная сыворотка; 2– нормальная сыворотка; 3– известный антиген; 4– неизвестный антиген

Реакцией преципитации (РП) называется осаждение из раствора антигена (преципитиногена) при воздействии на него иммунной сыворотки (преципитина) и электролита. Посредством РП можно выявить антиген в разведениях 1:100 000 и даже 1:1 000 000, т. е. в таких малых количествах, которые не обнаруживаются химическим путем.

Преципитиногены представляют собой ультрамикроскопические частицы белково–полисахаридной природы: экстракты из микроорганизмов, органов и тканей, патологического материала; продукты распада бактериальной клетки, их лизаты, фильтраты. Преципитиногены обладают термоустойчивостью, поэтому для их получения материал подвергается кипячению. В РП используются жидкие прозрачные антигены.

Преципитирующие сыворотки обычно получают гипериммунизацией кроликов циклами в течение нескольких месяцев, вводя им бактериальные взвеси, фильтраты бульонных культур, аутолизаты, солевые экстракты микроорганизмов, сывороточные белки.

Постановка РП Асколи. В узкую пробирку диаметром 0,5 см с неразведенной преципитирующей сывороткой в количестве 0,3–0,5 мл, держа ее в наклонном положении, пастеровской пипеткой с тонко оттянутым капилляром медленно по стенке наслаивается такой же объем антигена. Чтобы не смешать две жидкости, пробирку осторожно ставят вертикально. При положительной реакции в пробирке на границе между сывороткой и исследуемым экстрактом через 5–10 мин (иногда 1–2 ч) появляется серовато–белое кольцо (рис. 30, а). Постановка реакции обязательно сопровождается контролями сыворотки и антигена.

Реакция Асколи применяется для идентификации сибиреязвенного, туляремийного, чумного антигенов. Она нашла также применение в судебной медицине для определения видовой принадлежности белка, в частности кровяных пятен, в санитарной практике при выявлении фальсификации мясных, рыбных, мучных изделий, примесей в молоке. Недостатком этой РП является нестойкость преципитата (кольца), который исчезает даже при легком встряхивании. Кроме того, с ее помощью нельзя определить количественный состав антигенов, участвующих в формировании преципитата.

Рис. 31 Реакции связывания комплемента: I– положительная; 11, 111– отрицательные; Ат – антитело; Аг – антиген; К – комплемент; Эр – эритроциты барана

Реакция преципитации Оухтерлони. Реакцию ставят на чашках Петри в лунках агарового геля. В качестве геля используют хорошо отмытый прозрачный 1% агар. Антигены и сыворотки вносятся з агаровый гель так, чтобы лунки, содержащие их, находились на определенном расстоянии. Диффундируя навстречу друг другу и соединяясь друг с другом, антитело и антиген образуют через 24 – 48 ч иммунный комплекс в виде белой полосы (рис. 30, б). При наличии сложного по составу преципитиногена возникает несколько полос. При этом полосы серологически родственных антигенов сливаются воедино, а полосы разнородных перекрещиваются, что позволяет определить детали антигенной структуры исследуемых веществ. Широко используется для диагностики заболеваний, вызываемых вирусами и бактериями, продуцирующими экзотоксины.