Інструкційна картка до проведення лабораторного заняття № 5

1.Тема заняття «Вивчення властивостей ферментів».

2. Мета проведення заняття: ознайомитись з основними властивостями ферментів, їх відношенням до зміни температури, значення рН, різних реагентів.

2.1.Після виконання роботи студент повинен

знати основні властивості ферментів.

уміти визначати специфічність дії, оптимальні умови дії ферментів.

3. Матеріально-технічне оснащення робочого місця:

обладнання: штатив з пробірками, пробіркотримачі, нагрівальний пристрій, термостат (водяна баня), скляні палички, стаканчики; термометр;

реактиви, матеріали: 0,1 % - ний розчин крохмалю, 1 % -ний розчин йоду в йодиді калію, 1 н розчин хлоридної кислоти; препарат ферменту амілази, 1% -ний розчин пепсину; розчин уреази; 1-% ний розчин фенолфталеїну; дистильована вода; 1% -ний розчин сечовини; молоко.

4. Інструктаж з техніки безпеки : інструкція №1, 2, 5, 7.

5. Короткі відомості з теоретичної частини роботи.

Ферменти - це білки з каталітичними властивостями, що зумовлені їх здатністю впливати на деякі речовини в хімічних реакціях. За рядом ознак ферменти відрізняються від неорганічних каталізаторів:

1) діють за дуже м’яких умов;

2) мають високу специфічність дії;

3) чутливі до дії температури;

4) залежні від рН середовища ;

5) їм характерна кооперативність і запрограмованість етапів дії.

Вони не втрачають своєї активності навіть при виділенні з живого організму, що використовується в харчовій, фармацевтичній, хімічній промисловості.

За типом реакції, яку каталізують ферменти їх поділяють на 6 класів: 1) оксидоредуктази - каталізують окисно-відновні реакції ; 2) трансферази - каталізують процеси переносу окремих груп від одних речовин на інші; 3) гідролази - каталізують реакції гідролітичного розщеплення ; 4) ліази - регулюють відщеплення груп негідролітичним шляхом ; 5) ізомерази - каталізують реакції ізомеризації; 6) лігази (синтетази) - каталізують реакції синтезу за участю енергії АТФ та ін.

6. Зміст і послідовність виконання

Дослід 1. Визначення специфічності дії ферментів

Приготуйте 9 чистих пробірок. В перші три налийте по 5 мл 0,1 % -ного розчину крохмалю, у наступні три – по 5 мл 1 %-ного розчину сечовини і по 3 краплі 1% -ного розчину фенолфталеїну, а в решту пробірок – по 5 мл молока. Пробірки згрупуйте по три. В кожній трійці знаходяться пробірки з різним субстратом – з крохмалем, сечовиною і молоком. В першу трійку внесіть по 1 мл уреази, в другу – по 1 мл розчину амілази, в третю – по 1 мл 1% -ного розчину пепсину. Всі пробірки витримуйтеь протягом 15 хв при температурі 37^оС, після чого перевірте у них дію ферментів. У пробірки з крохмалем додайте по краплинах 1% -ний розчин йоду в калій йодиді. Відзначте зміну забарвлення в пробірках з крохмалем і сечовиною під дією відповідно амілази та уреази, зсідання молока у пробірці з пепсином.

Дослід 2. Вплив температури на дію амілази

У дві пробірки налийте по 5 мл препарату ферменту амілази. Першу пробірку залиште за кімнатної температури, а другу пробірку нагрівайте в полум’ї пальника, щоб інактивувати фермент дією високої температури. ( Розчин з амілазою кипить поштовхами й піниться, але потрібно , щоб і піна, якщо вона утворюється, прогрілась; амілаза тварин досить стійка до підвищення температури, тому кип’ятіння продовжуйте 3-5 хв). Прокип’яченій амілазі дайте прохолонути до кімнатної температури.

В обидві пробірки з амілазою налийте по 5 мл 0,1 % - ного розчину крохмалю . Пробірки вмістіть в водяну баню, температура води в якій підтримується близько 37⁰С. Пробірки витримайте по 30 хв , а потім додайтеь по 1-2 краплини 1,0 % -го розчину йоду в калію йодиді. Забарвлення розчинів у пробірках порівняйте .

Дослід 3. Вплив рН на активність амілази

У дві пробірки з 1 мл препарату ферменту амілази налийте : в першу – 1 мл 1,0 н розчину хлоридної кислоти і 5 мл 0,1 % -го розчину крохмалю, в другу – 1 мл дистильованої води і 5 мл 0,1 % -го розчину крохмалю. Після витримування пробірок при температурі 37⁰С протягом 30 хв у них додайте при помішуванні по 5 краплин 1% -ного розчину йоду в калій йодиді. Порівняйте забарвлення розчинів у пробірках.Спостерігайте зміни.

7. Методичні рекомендації з виконання та оформлення роботи: після проведення дослідів зробіть висновок про специфічність дії та оптимальні показники дії ферментів

8.Рекомендована література

1.Кучеренко М.Є. та ін Біохімія. – К.: ВПЦ «Київський університет»2002. с.134-170

2. Боєчко Ф.Ф. Біологічна хімія. – К.:Вища школа,1995, с.231-242.

3.Кретович В.Л. Биохимия растений. – М.: Высшая школа.1985.

4. Салюк А.І. Практикум для студентів технологічних спеціальностей денної форми навчання. – К.: НУХТ.2008, с.54-56; 62-64.