«Энгельсский медицинский колледж»
Руководство для студентов к практическим занятиям по микробиологии
«Энгельсский медицинский колледж»
А.В. Палиенко
РУКОВОДСТВО К ПРАКТИЧЕСКИМ ЗАНЯТИЯМ
по курсу «Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований»
раздел «Морфология микроорганизмов»
Руководство для студентов
отделения 060110 «Лабораторная диагностика»
г. Энгельс, 2009 г.
РЕЦЕНЗИЯ
на руководство к практическим занятиям
по курсу «Микробиология с основами эпидемиологии и методами микробиологических исследований»
раздел «Морфология микроорганизмов»,
составленное преподавателем микробиологии А.В. Палиенко
Представленная работа составлена в соответствии Государственного стандарта и квалификационной характеристики специальности 060110 «Лабораторная диагностика». Построено в соответствии современными педагогическими и методическими требованиями. Данное руководство обеспечит самостоятельность студентов в работе на практических занятиях по микробиологии и облегчит педагогический процесс. Для эффективного усвоения материала имеются вопросы и тестовые задания для студенческого самоконтроля. По каждому занятию указан объем выполняемой практической работы. Приведенные в работе алгоритмы, рисунки, схемы помогут систематизировать и закрепить знания студентов по данной теме.
В руководстве приводится микроскопический метод исследования микроорганизмов, который позволяет изучить тинкториальные и морфологические свойства микроба, степень чистоты выделенной культуры, расположение микроорганизмов в мазках, выявить структуры клетки – споры, капсулы, определить подвижность микроба, дифференцировать кислотоустойчивые бактерии. Все эти признаки необходимы для идентификации микроорганизма. С помощью этого метода можно подтвердить клинический диагноз инфекционных заболеваний.
Учебное пособие предназначено для использования во время практических занятий по микробиологии раздел «Морфология микроорганизмов», а также для самостоятельной работы студентов дома.
Рецензент: Глинская Е.В., к.б.н., доцент кафедры микробиологии и физиологии растений биологического факультета СГУ им. Н.Г.Чернышевского
СОДЕРЖАНИЕ
Предисловие…………………………………………………...……...5
Введение в практикум………………………………………………..6
Занятие №1……………………………………………………………8
Занятие №2……………………………………………………………16
Занятие №3……………………………………………………………19
Занятие №4……………………………………………………………22
Занятие №5…………………………………………………………....24
Занятие №6…………………………………………………………....26
Ответы на тестовые задания ………………………………………...31
Список литературы…………………………………………………..32
Приложение №1……………………………………………………....33
Приложение №2……………………………………………………....35
ПРЕДИСЛОВИЕ
Лабораторные занятия проводятся в специально оборудованных помещениях, имеющих подводку электричества к каждому рабочему месту, а также раковину с водопроводной водой. Поверхность рабочих столов покрыта стеклом для лучшей дезинфекции. За каждым студентом закрепляется постоянное рабочее место, на котором должно быть оборудование, необходимое для выполнения конкретного задания, рабочая тетрадь, ручка и карандаш. Для личных вещей отводится специальное место.
В начале занятия студенты знакомятся с определенным заданием, изложенным в учебном пособии, делают записи основных методик в рабочей тетради, а затем приступают к выполнению работы под наблюдением преподавателя. Результаты исследований в виде рисунков, описаний морфологии микроорганизмов заносятся в тетрадь, и работа представляется преподавателю для проверки.
В связи с тем, что на практических занятиях студенты работают с живыми культурами микробов, анилиновыми красителями, химическими веществами, а также используют электрические приборы (лампы) и спиртовки, они обязаны выполнять основные правила техники безопасности (приложение №1,2).
Все задания студентами выполняются самостоятельно в соответствии с задачами, поставленными в учебном пособии.
Автор будет признателен за все замечания и предложения по содержанию включенного материала и совершенствованию методики обучения.
ВВЕДЕНИЕ В ПРАКТИКУМ
Микроскоп (рис.1) - оптический прибор для изучения микрообъектов. Студенческие лаборатории чаще оснащены микроскопами МБИ-1 . В научных и практических микробиологических лабораториях используют микроскопы отечественных марок: МБР – 1, МБИ-1, МБИ-2, МБИ-3, Биолам Р-1 и другие. Они предназначены для изучения формы, структуры, размеров и других признаков микроорганизмов, величина которых не менее 0.2-0.3 мкм. Поскольку микробы очень малы, то измеряются они в микрометрах (мкм - тысячная доля миллиметра) и потому изучение их возможно только с помощью микроскопов, дающих достаточно большое увеличение. Общее увеличение микроскопа слагается из произведения увеличений объектива и окуляра. Обычно при микробиологических исследованиях для получения полезного увеличения в 600-1000 раз используют объективы с увеличением в 90-100 раз и окуляры, увеличивающие изображение в 7-10 раз.
Объективы подразделяются на сухие и иммерсионные (погруженные). При работе с сухими объективами между фронтальной линзой и изучаемым объектом находится воздух. При этом, в виду разницы коэффициентов преломления предметного стекла и воздуха, часть световых лучей отклоняется и не попадает в объектив.
Объективы иммерсионные обозначают буквами О.И. и цифрами х90 и х100.
Современные микроскопы имеют ряд усовершенствований. Так, бинокулярный микроскоп с двумя тубусами дает возможность вести наблюдение одновременно обоими глазами.
Для изучения неокрашенных объектов используется фазово-контрастное устройство, с помощью которого можно получить четкое контрастное изображение прозрачных, не имеющих окраски микроорганизмов. При прохождении света через окрашенный препарат, изменяется интенсивность света (амплитуда световой волны), что легко улавливается глазом. При прохождении же пучка света через неокрашенный, прозрачный объект изменяется только скорость его движения, т.е. фаза колебаний светового луча, что глазом не улавливается. Принцип фазово-контрастного устройства заключается в переводе невидимых колебаний света в амплитудные видимые.
В ряде специальных исследований, в частности при изучении внутриклеточных структур микроорганизмов, используется люминесцентная микроскопия, основанная на способности некоторых объектов при специальном окрашивании флюорохромами светиться в коротковолновых лучах света (ультрафиолетовых, синих и др.). К флюорохромам относятся акридиновый желтый, пиронин, акридиновый оранжевый. Люминесцентная микроскопия проводится с обычным микроскопом, снабженным источником ультрафиолетовых лучей и набором светофильтров, выделяющих коротковолновую часть спектра.
Наиболее совершенными приборами, дающими возможность получать полезное увеличение объекта в 200-500 тыс. и более раз, являются электронные микроскопы, в которых вместо световых лучей используется поток электронов. С помощью электронных микроскопов удается рассмотреть белковые молекулы.
Рис. Микроскоп:
1 – окуляр, 2 – тубус,
3 – тубусодержатель,
4 – револьвер объективов,
5 – предметный столик,
6 – конденсор,
7 – микровинт, 8 – макровинт
9 – зеркало, 10 - основание
ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗАНЯТИЕ №1
Простые и сложные методы окрашивания. Окраска препаратов по методу Грама. Способы приготовления красителей.
Студент должен знать:
- технику безопасности в кабинете (лаборатории) микробиологии (приложение №1),
- требования к помещению и оборудованию в лаборатории (приложение №2),
- характеристика «грязной» и «чистой» зоны лаборатории. Перечень комнат и их предназначение,
- требования к проведению работ в бактериологической лаборатории,
- спецпрофилактика сотрудникам лаборатории,
- этапы приготовления препарата, его фиксация: виды и цель,
- простые методы окрашивания,
- сложные методы, сущность метода Грама,
- особенности окраски по методу Грама, красители и реактивы,
- подготовка насыщенных, водных растворов и красителей.
Студент должен уметь:
- доставка патологического материала. Материал на патогенные биологические агенты (ПБА),
- прием материала в регистратуре,
- обработка отработанного материала и лабораторной посуды,
- поведение при «аварии» в лаборатории,
- приготовление бактериального препарата,
- окраска препарата по методу Грама,
-микроскопия окрашенных препаратов с использованием иммерсионной системы,
- соблюдение мер безопасной работы с живыми культурами микробов,
- обработка рабочего места и рук дез. веществами.
Этапы самостоятельной аудиторной работы:
Подготовить препараты и окрасить их простым методом и по методу Грама
Препараты промикроскопировать с иммерсией
Обработать рабочие места и руки
Зарисовать результаты микроскопирования в дневник
Рецепты приготовления красителей
Карболовый фуксин Циля:
- насыщенного спиртового раствора основного фуксина – 10 мл
- раствора карболовой кислоты 5% - 90мл
Внимание! Карболовую кислоту вливают в краситель, а не наоборот. Смесь встряхивают, фильтруют и сливают во флакон
Или
- основной фуксин в порошке - 1 гр
- карболовая кислота кристаллическая -5 гр
- глицерин -0,5 мл
- спирт 96% - 10 мл
- вода дистиллированная - 100мл
2. Насыщенные спиртовые растворы (исходные):
- красителя - 1гр
- спирта 96% - 10 мл
Смесь помещают в термостат на несколько дней до полного растворения. Взбалтывают ежедневно, хранят с притертыми пробками
Фуксин Пфейффера:
- фуксин Циля – 1 мл
- воды дистиллированной – 9 мл
Готовят непосредственно перед употреблением, т.к. раствор нестойкий.
Бумага по Синеву:
- 1%спиртовой раствор кристаллического фиолетового:
на 100 мл 96% спирта добавляют 1 гр сухого красителя и 3 мл глицерина
Полоски фильтровальной бумаги пропитывают раствором и высушивают.