
- •ГБОУ ВПО «Южно-Уральский государственный медицинский университет» Минздрава России
- •Световая
- •Возможности световой микроскопии
- •Световой микроскоп – это точный оптико- механический прибор. Существует множество моделей световых микроскопов.
- •Устройство светового микроскопа
- •Методы световой микроскопии
- •Метод светлого поля
- •Микроскопия в темном поле
- •Фазово-контрастная микроскопия.
- •Метод интерференционного контраста
- •Поляризационная микроскопия
- •Люминисцентная микроскопия
- •Люминесцентная микроскопия
- •Физические основы люминесценции:
- •История развития люминесцентной микроскопии:
- •Разновидности люминесценции:
- •Флюорохромы
- •Устройство люминесцентного микроскопа
- •Пример люминесцентного микроскопа
- •Устройство люминесцентного микроскопа
- •Преимущества люминесцентной микроскопии:
- •Значение люминесцентной микроскопии
- •Клетки рака HeLa при увеличении в 300 раз. HeLa — линия «бессмертных» клеток,
- •Флуоресцентная микроскопия человеческого эндотелия
- •Флуоресцентная микроскопия аномальных митотических веретен в клетках рака молочной железы
- •Люминесцентная микроскопия нормальной клетки
- •Люминесцентная микроскопия раковой клетки
- •Флуоресцентная микроскопия наночастиц в макрофагах
- •Люминесцентная микрофотография макрофага, внутри которого видны фагоцитированные бактерии, излучающие красное свечение
- •6 клеточный лошадиный эмбрион
- •Тема:
- •«…Сколь много Микроскоп нам тайностей открыл,
- •Электронная микроскопия
- •Электронная микроскопия как самостоятельное научное
- •Локализация в клетке фермента нуклеотиддифосфотазы в аппарате Гольджи. Тонкий срез клетки инкубирован с
- •Образование красного, то есть содержащего эритроциты, тромба (электронная микроскопия, увеличение в 5700 раз)
- •Стволовые клетки при электронной микроскопии
- •Электронная микроскопия
- •Снимок растрового (сканирующего) электронного микроскопа
- •Тема:
- •Для изучения химического состава биологических структур —
- •Метод радиоавтографии
- •Схема метода радиоавтографии
- •Методы иммуно-флюоресцентного анализа
- •Моноклональные антитела прикрепляются строго только к своим мишеням эпитопам и могут доставлять к
- •На снимке: Моноклональные антитела, атакующие специфический антиген.
- •Гистохимические методы
- •ЦИТОХИМИЯ-
- •Основные методы цитохимии:
- •1.Микрохимия
- •2.Микроспектрофотометрия
- •3.Микроинтерферометрия
- •Интерферограммы на экране телевизионного интерферометра
- •Внешний вид цифрового телевизионного интерферометра Zygo Mark II
- •4. Цитофотометрия окрашенных клеток - это качественное и(или) количественное определение вещества в клетке
- •Один из точных методов цитофотометрии Реакция Фёльгена
- •5.Флуоресцентная
- •Изображение клетки с введенными в нее флуоресцентными белками. Глубина расположения молекул определяется цветом:
- •Метод цитохимии оказался очень плодотворным, дав биохимикам возможность выделять разные органеллы клетки в
- •Тема:
- •Микроскопическое исследование живых клеток и тканей широко применяется в цитологии и позволяет
- •Прижизненное окрашивание клеток
- •Методы прижизненной окраски
- •Исследования клеток в организме (in vivo)
- •Исследования живых клеток и тканей в культуре (in vitro)
- •Соматическая гибридизация
- •Гибридомы
- •Методы микрохирургии
- •Микрофотографирование
- •Микрокиносъемка
- •Тема:
- •Гистологические методы исследования применяются для изучения строения и функции клеток и тканей человека,
- •После забора материала выполняется его подготовка к исследованию, включающая в себя ряд этапов:
- •Формалин (формальдегид, или муравьиный альдегид). Является наиболее простым и широко распространенным фиксатором
- •Кроме перечисленных фиксаторов общего назначения, существуют и специальные фиксаторы.
- •2. Проводка — процесс дегидратации (обезвоживания) фрагмента ткани и пропитки его парафином.
- •3. Заливка — процесс создания блока, достаточно твердого, чтобы быть пригодным для резки.
- •4. Резка, или микротомирование - представляет собой изготовление тонких
- •5. Окрашивание - позволяет выявлять внутриклеточные структуры,
- •6. Заключение срезов - представляет собой помещение окрашенного среза, монтированного на предметном стекле,
- •Шкаф для архивирования стекол
- •В медицинских исследованиях, особенно в практике патологоанатомических лабораторий, очень распространёно используются методы исследования

Изображение клетки с введенными в нее флуоресцентными белками. Глубина расположения молекул определяется цветом: красный соответствует самым нижним слоям, фиолетовый — наиболее приближенным к наблюдателю.

Метод цитохимии оказался очень плодотворным, дав биохимикам возможность выделять разные органеллы клетки в относительно чистом виде.
Он позволяет, кроме того, определять химический состав органелл и содержащиеся в них ферменты и на основании получаемых данных делать выводы об их функциях в клетке.

Тема:
Прижизненное исследование клеток

Микроскопическое исследование живых клеток и тканей широко применяется в цитологии и позволяет
получить |
наиболее |
полную информацию |
об их |
|
жизнедеятельности |
— |
проследить движение, |
||
процессы |
деления, |
разрушения, |
роста, |
|
дифференцировки и взаимодействия клеток, |
|
|||
продолжительность их жизненного |
цикла, |
|||
реактивные изменения в |
ответ на действие |
|||
различных факторов. |
|
|
|

Прижизненное окрашивание клеток
Витальное |
Суправитальное |
краситель вводят в
организм животного, при этом он
избирательно окрашивает
определенные клетки, их органеллы или межклеточное вещество.
окрашивание живых клеток, выделенных из организма.

Методы прижизненной окраски
Прижизненные красители - это органические соединения, обладающие относительно небольшой токсичностью для живых клеток.
Различают основные (нейтральный красный, метиленовый синий) и кислые красители (трипановый синий, литиевый кармин).
При работе с любым из витальных красителей следует учесть, что краситель нужно растворять только в той среде, в которой могут переживать клетки исследуемого организма.
Окраска живых клеток дает возможность выявлять изменения, происходящие в клетках и тканях при разных внешних воздействиях.

Исследования клеток в организме (in vivo)
1.Метод вживления прозрачных камер с изучаемыми клетками в организм животного.
2.Метод трансплантации клеток крови и костного мозга от здоровых животных-доноров животным-реципиентам, подвергнутым смертельному облучению.

Исследования живых клеток и тканей в культуре (in vitro)
Культивирование клеток – это процесс искусственного выращивания клеток в контролируемых условиях in vitro.
Выделение
клеток
Из крови; из мягких тканей с помощью ферментов разрушающих внеклеточный матрикс.
Культивирование
клеток
Клетки выращивают на специальных питательных средах;
обеспечиваются стерильность среды и определенная температура;
различают суспензионные и монослойные культуры
Использование клеточных культур
для проведения экспериментальных наблюдений на клетках и тканях человека;
для гибридизации клеток;
для промышленного производства вакцин и различных продуктов биотехнологии.

Соматическая гибридизация
Соматическая гибридизация – это слияние клеток, принадлежащих к разным биологическим видам.
Гетерокарион, который образуется при слиянии двух клеток различных типов, способен к митозу, в результате чего образуется гибридная клетка.
Клонирование гибридных клеток приводит к образованию гибридных клеточных линий, которые используются для изучения генома.

Гибридомы
Гибридомы – это бессмертные клеточные клоны, продуцирующие антитела одной специфичности. Их получают при слиянии нормальных В- лимфоцитов, продуцирующих антитела, с опухолевыми клетками (В-лимфомы).
Каждый клон гибридомы является источником моноклональных антител.