1.3. °Оценка токсичности веществ в условиях острого воздействия

Оценка токсичности в условиях острого воздействия проводится путем определения следующих показателей:

1. средние смертельные дозы и концентрации;

2. коэффициент возможности ингаляционного отрав­ления (КВИО);

3. порог и зона острого действия;

4. раздражающее, местное и кожно–резорбтивное действие.

1.3.1. Средние смертельные дозы и концентрации

DL₅₀ – средняя смертельная доза при введении в желудок – доза вещества, вызывающая гибель 50% животных при однократном введении в желудок.

CL₅₀ – средняя смертельная концентрация – концентрация вещества, вызывающая гибель 50% животных при 2–4–часовом ингаляционном воздействии (2 ч – мыши, 4 ч – крысы).

Определение средних смертельных кон­центраций целесообразно произво­дить не менее чем на двух видах лабораторных жи­вотных. Обычно используются белые мыши (масса 18–24 г) и крысы (масса 180–240 г). Картина отравления регистри­руется в течение 2 недель. После двухнедельного срока на­блюдения отмечают количество погибших животных.

Определение DL50	Определение CL50
Каждая испытуемая доза вводится 6 белым мышам в чистом виде, в водном растворе или в 0,2 мл рафинированного подсолнеч­ного масла. За 3 ч до опыта мышей лишают корма и вновь дают его через 3 ч после отравления.	Затравка производится однократно в камерах при динамической подаче вредного вещества. Каждая концентрация испытывается не менее чем на 6 животных. Во время затравки регистрируют проявления раздражающего действия, потерю рефлексов на звуки, наступление бокового положения, судороги, наркоз.

Расчет средней смертельной концентрации и дозы может производиться по методу Першина, позволяющему вычислить или

при разном числе жи­вотных в группах и разных интервалах между выбранными дозами:

,

где – смертельная концентрация для 50% мышей при ингаляци­онной затравке, мг/л;

а, b – величины смежных испытанных концентра­ций, мг/л;

m, n – соответствующие этим концентрациям частоты смертельных исходов в процентах.

При расчете по формуле Першина составляется специальная таб­лица, облегчающая проведение расчетов (см. работу 2).

2. Коэффициент возможности ингаляционного отрав­ления (КВИО)

КВИО – коэффициент возможности ингаляционного отравления – отношение максимально допустимой концентрации вредного вещества в воздухе при температуре 20оС к средней смертельной концентрации для мышей:

КВИО = , где

– абсолютная летучесть при температуре 20°С, мг/м³;

–средняя смер­тельная концентрация, мг/м³.

Вещества, имеющие большое значение КВИО, опасны в отноше­нии развития ингаляционных отравлений.

3. Порог и зона острого действия

Минимальная разовая концен­трация, вызывающая измене­ния биологических показа­телей на уровне целостного организма при однократном поступлении вещества в организм, называется порогом острого действия (Lim_ac , мг/м³). Пороговая доза, вызывающая минимальный токсический эффект у 50% объектов, обозначается Dmin₅₀ (мг/г массы тела).

Lim_ac и зона острого действия (Z_ac) характеризуют опасность вещества и вероятность острого отравления. При определении порога острого действия используют не менее двух видов животных. Время воздействия для мышей составляет 2 ч, для крыс – 4ч.

Z_ac – зона острого действия – отношение средней смертельной концентрации к порогу острого действия:

,

где – сред­няя смертельная концентра­ция, мг/м³.

Узость зоны острого действия указывает на высокую вероятность острых отравлений, и, наоборот, чем шире зона острого действия, тем сильнее выражены компенсаторные реакции при действии данного яда (обнаружение и реагирование) и тем ниже потенциальная возможность острых отравлений.

4. Раздражающее, местное и кожно–резорбтивное действие

Раздражающее действие оценивается по изменению частоты дыхания у кроликов, изменениям в дыхательной системе у крыс, по появлению слюнотечения у кошек и субъективным ощу­щениям у человека.

Исследо­вание местного действия может производиться путем внесения изу­ча­емого вещества в конъюнктивальный мешок глаза кролика с последу­ющей реги­страцией гиперемии, отечности, инъекции сосудов склеры и роговицы, её про­зрачности и т.п.

Кожно–резорбтивное действие изучают путем аппликаций вещества на вы­стриженные участки кожи живота крыс или кроликов. Место ап­пликации яда за­крывают колпачком. Наблюдения за животными про­должают 2 недели. Для веществ, вызывающих гибель животных, опреде­ляют среднюю смертельную концентрацию при нанесении на кожу. Для экспресс–оценки местного и кожно–резорбтивного действия применя­ют метод аппликаций яда на кожу хвостов мышей. При изучении кожно–резорбтивного действия на лабораторных животных исследуют состояние кожных покровов, определяют количество вещества в крови, моче и фекалиях, накопление вещества в подкожной жировой клетчатке.