- •Методика проведення практичного заняття
- •Методичні рекомендації по виконанню практичної роботи
- •1. Культуральні властивості s.Typhi на вісмут-сульфітному агарі та на середовищі Плоскірева (демонстрація).
- •2. Ріст s.Typhi у середовищі Рапопорта (демонстрація).
- •3. Мікроскопія мікропрепаратів "s.Typhi", "s.Paratyphi a", "s.Paratyphi b", (демонстрація).
- •4. Діагностичні (для ідентифікації сальмонел за антигенною будовою та серодіагностики захворювань) та лікувально-профілактичні препарати.
- •5. Вивчення антигенної будови сальмонел за допомогою сальмонельозних аглютинуючих сироваток у ра (демонстрація).
- •6. Ріст s.Typhi на середовищах Гісса (демонстрація).
- •7.1. Серодіагностика черевного тифу, паратифу а, паратифу в за допомогою реакції Відаля (демонстрація).
- •7.2. Серодіагностика бактеріоносійства збудника черевного тифу за допомогою реакції непрямої VI-гемаглютинації (демонстрація).
- •"Мікробіологія черевного тифу, паратифів а і в та сальмонельозу" для самостійної роботи студента
- •Пояснення до проведення мікробіологічної діагностики черевного тифу та паратифу а та паратифу в
- •1/ Посів крові.
- •2/ Посів фекалій та сечі.
- •3/ Посів жовчі.
- •4/ Посів кісткового мозку.
- •5/ Посів вмісту розеол.
- •6/ Посів секційного матеріалу.
- •1/ Виділення гемокультури та мієлокультури.
- •2/ Виділення копрокультури, уринокультури, білікультури, розеолокультури та виділення чистої культури з секційного матеріалу.
- •Біохімічні властивості ешерихій та тифо-паратифозних бактерій
- •Мікробіологічна діагностика сальмонельозів
3. Мікроскопія мікропрепаратів "s.Typhi", "s.Paratyphi a", "s.Paratyphi b", (демонстрація).
При вивченні мікропрепаратів, які пофарбовані за методом Грама, студент повинен пересвідчитися, що S.typhi, S.paratyphi A та S.paratyphi B являють собою короткі прямі грамнегативні монобактерії і на підставі цього зробити висновок: різні види сальмонел за морфологічними та тинкториальними властивостями не розрізняються між собою і не відрізняються від шигел та кишкової палички.
4. Діагностичні (для ідентифікації сальмонел за антигенною будовою та серодіагностики захворювань) та лікувально-профілактичні препарати.
4.1. Адсорбована аглютинуюча полівалентна О-сироватка для ідентифікації сальмонел. Діагностичний препарат, який містить специфічні антитіла до О-антигенів основних (А,В,С,D,Е) та рідкісних (F,G,H) груп сальмонел ─ при взаємодії специфічних антитіл з відповідними антигенами відбувається утворення аглютинату. Аглютинуюча сироватка отримана шляхом гіперімунізації кроликів сумішшю О-антигенів основних та рідкісних груп сальмонел з наступною адсорбцією неспецифічних антитіл. Використовується у реакції аглютинації на склі при бактеріологічному методі дослідження культури з метою ідентифікації сальмонел від шигел та ЕІЕС, які на середовищах Плоскірева та Ендо також утворюють лактозонегативні колонії.
4.2. Адсорбовані сальмонельозні аглютинуючі діагностичні сироватки: полівалентна групова О- (О1-, О4-, О5-, О12-) аглютинуюча діагностична сироватка та моновалентна О4- аглютинуюча діагностична сироватка. Діагностичні препарати, які містять специфічні антитіла до О1-, О4-, О5-, О12-антигенів сальмонел – групових О-антигенів та тільки О4-антигену сальмонел серогрупи В (за класифікацією Кауфманна-Уайта) ─ при взаємодії специфічних антитіл з відповідними антигенами сальмонел відбувається утворення аглютинату. Аглютинуючі сироватки отримані шляхом гіперімунізації кроликів сумішшю групових О-антигенів (О1-, О4-, О5-, О12-) або груповим О4-антигеном сальмонел з наступною адсорбцією неспецифічних антитіл. Використовуються у реакції аглютинації на склі з метою визначення серогрупи сальмонели.
4.3. Адсорбована черевнотифозна аглютинуюча моновалентна Нd-сироватка. Діагностичний препарат, який містить специфічні антитіла до Нd-антигену S.typhi – видового антигену збудника черевного тифу. Аглютинуюча сироватка отримана шляхом гіперімунізації кроликів Нd-антигеном S.typhi з наступною адсорбцією неспецифічних антитіл. Використовується у реакції аглютинації на склі з метою визначення серовару сальмонели.
4.4. Люмінесцентна черевнотифозна сироватка. Мета - діагностична – по відомому антитілу, яке мічене флюорохромом (ізотіоцианатом флюоресцеїном), визначається невідомий антиген. Препарат являє собою специфічні антитіла до збудника черевного тифу або до антигенів L-форм збудника, які кон‘юговані з флюорохромом. При утворенні комплексу сальмонела─специфічне антитіло спостерігається його світіння при люмінесцентній мікроскопії (пряма реакція Кунса). Препарат застосовується для прискореного виявлення чистої культури збудника черевного тифу у матеріалі від хворого, харчових продуктах та воді (метод експрес-діагностики) або при бактеріологічному методі дослідження збудника черевного тифу (з культурою, яка культивована у збагачувальному середовищі).
4.5. Моновалентні: черевнотифозний О9, паратифозні О2, О4-діагностикуми. Діагностичні препарати, який містять 3 млрд. завісь S.typhi, S.paratyphi A, S.schottmuelleri в 1 мл, вбитих кип‘ятінням протягом 1½-2 годин (відбулася руйнація джгутикових антигенів) – при їх взаємодії зі специфічними антитілами у сироватці хворого відбувається утворення аглютинату. Препарат використовується у реакції Відаля (розгорнута реакція аглютинації) для визначення титру специфічних антитіл у сироватці хворого на черевний тиф, паратифи А і В (серологічний метод діагностики).
4.6. Моновалентні: черевнотифозний Нd, паратифозні На, Нb-діагностикуми. Діагностичні препарати, які містять 3 млрд. завісь S.typhi, S.paratyphi A, S.schottmuelleri в 1 мл, які оброблені формаліном (формалін знижує активність О-антигену, зберігаючи незмінними Н-антигени) – при їх взаємодії зі специфічними антитілами в сироватці хворого відбувається утворення аглютинату. Препарат використовується в реакції Відаля для визначення титру специфічних антитіл у сироватці (серологічний метод діагностики). Антитіла до Нd, На, Нb-антигенів накопичуються у кінці захворювань відповідно на черевний тиф, паратиф А, паратиф В, зберігаються у високих титрах після видужання хворого протягом тривалого часу та присутні в осіб після їх щеплення.
4.7. Черевнотифозний моновалентний Vi-діагностикум. Діагностичний препарат, який містить 3 млрд. завісь штамів S.typhi, що містять Vi-антиген, в 1 мл, які оброблені спиртом. Препарат використовується в реакції аглютинації Відаля для визначення титру специфічних антитіл до Vi-антигену (серологічний метод діагностики). Антитіла до Vi-антигену накопичуються у реконвалесцентів та виявляються у бактеріоносіїв.
4.8. Сальмонельозний комплексний еритроцитарний діагностикум АВСDЕ. Діагностичний препарат, який являє собою завісь еритроцитів барана з адсорбованими на їх поверхні О-антигенами сальмонел груп АВСDЕ. Препарат використовується для виявлення специфічних антитіл до О-антигенів сальмонел (серологічний метод діагностики) у реакції непрямої гемаглютинації (РНГА) з парними сироватками. Еритроцити барана, що сенсибілізовані О-антигенами сальмонел, аглютинують зі специфічними антитілами у сироватці хворого та утворюють «пухкий» аглютинат. Зростання титру антитіл у 2-4 і більше разів є доказом, що людина хвора на сальмонельозну інфекцію.
4.9. Черевнотифозний еритроцитарний О9-діагностикум. Діагностичний препарат, який являє собою завісь еритроцитів барана з адсорбованими на їх поверхні О9-антигенами. Препарат використовується для виявлення специфічних антитіл до О9-антигену сальмонел у сироватці хворого на черевний тиф (серологічний метод діагностики) у реакції непрямої гемаглютинації з парними сироватками. Еритроцити барана, що сенсибілізовані О9-антигеном, аглютинують зі специфічними антитілами сироватки хворого та утворюють «пухкий» аглютинат з нерівним фестончатим краєм (перевернутої «парасольки») на дні лунок. Зростання титру антитіл у 2-4 і більше разів є доказом, що людина хвора на черевний тиф.
Реакція є більш чутливою у порівнянні з реакцією Відаля.
4.10. Черевнотифозний еритроцитарний Vi-діагностикум. Діагностичний препарат, який являє собою завісь еритроцитів людини І (О) групи крові, оброблених формаліном та сенсибілізованих Vi-антигеном S.typhi. Препарат використовується для виявлення специфічних антитіл до Vi-антигену збудника черевного тифу за допомогою реакції непрямої Vi-гемаглютинації (серологічне виявлення бактеріоносіїв та дослідження реконвалесцентів). Навантажені Vi-антигеном еритроцити аглютинують у присутності специфічних антитіл сироватки, утворюють "пухкий" аглютинат з нерівним фестончатим краєм (перевернутої "парасольки") на дні лунок.
4.11. Бактеріофаг сальмонельозний полівалентний АВСDЕ (таблетований). Лікувально-профілактичний препарат, який містить стерильний фільтрат фагів, що лізують S.paratyphi A, S.schottmuelleri, S.typhimurium, S.heidelberg, S.newport, S.infantis, S.choleraesuis, S.oranienburg, S.dublin, S.enteritidis, S.gallinarum, S.anatum, S.newlands. Випускається у вигляді таблеток з кислотостійким покриттям. Використовується для екстреної профілактики та лікування сальмонельозної інфекції.
4.12. Бактеріофаг черевнотифозний (таблетований). Лікувально-профілактичний препарат містить стерильний фільтрат фагів, що лізують S.typhi. Випускається у вигляді таблеток з кислотостійким покриттям. Призначається контактним особам для активної профілактики та хворим на черевний тиф для лікування.
4.13. Черевнотифозна спиртова вакцина, збагачена Vi-антигеном. Профілактичний препарат. Хімічна вакцина, в якій концентрація Vi-антигену збільшена в результаті відмивання спиртом частини жиророзчинних речовин, що входять до складу поверхневих антигенів S.typhi. Використовується для специфічної профілактики черевного тифу за епідпоказником.
4.14. Хімічна сорбована тифо-паратифозно-правцева вакцина. Містить повноцінні антигени черевнотифозних, паратифозних А і В бактерій та правцевий анатоксин. Використовується для специфічної профілактики черевного тифу, паратифів А і В, правцю за епідпоказником.
4.15. Черевнотифозна вакцина з секстанатоксином. Містить О– та Vi-антигени збудника черевного тифу та очищені концентровані анатоксини збудників правцю (Clostridium tetani), ботулізму (Clostridium botulinum типів А,В,Е), газової гангрени (Clostridium perfringens типу А та С.novyi), що сорбовані на Al(OH)3. Використовується для профілактики за епідпоказником.
