6. Осаждение белков органическими кислотами.

Принцип метода: Органические кислоты также вызывают необратимое осаждение белков. Большое практическое применение получили трихлоруксусная и сульфосалициловая кислоты, обладающие высокой чувствительностью по отношению к белку. Помимо белков, сульфосалициловая кислота осаждает также продукты их распада высокомолекулярные пептоны и полипептиды. Трихлоруксусная кислота способна осаждать только белки. После осаждения белков трихлоруксусная кислота удаляется путем кипячения фильтрата.

Реактивы: раствор яичного белка для высаливания; трихлоруксусная кислота, 10% раствор; сульфосалициловая кислота, 20% раствор.

Ход работы: К 5 каплям раствора белка добавляют 2 капли 20% раствора сульфосалициловой кислоты. Выпадает осадок белка.

К 5 каплям раствора белка добавляют 2 капли 10% раствора трихлоруксусной кислоты. Выпадает осадок белка.

7. Осаждение белков органическими растворителями.

Принцип метода: В органических растворителях, таких как спирт, ацетон, эфир и др., белки не растворяются и выпадают в осадок. В зависимости от природы белка требуются различные концентрации спирта. Спирт связывает воду, вызывая дегидратацию мицелл белка и неустойчивость их в растворе. Реакция осаждения белка спиртов обратима при кратковременном действии спирта на холоде.

Реактивы: раствор белка для высаливания; этиловый спирт или ацетон; хлористый натрий, насыщенный раствор;

Ход работы: К 5 каплям раствора белка приливают 15-20 капель этилового спирта или ацетона. Раствор мутнеет. Добавляют 1 каплю насыщенного раствора хлористого натрия, при стоянии выпадает белый осадок белка.

8. Осаждение белков алкалоидными реактивами.

Принцип метода: Осаждение белков алкалоидными реактивами также относится к необратимым реакциям. К группе реактивов на алкалоиды принадлежит танин, также пикриновая кислота, железистосинеродистая кислота, фосфорномолибденовые кислоты и др. Способность белков осаждаться теми же реактивами, что и алкалоиды, объясняется наличием как в белках, так и в аналогичных азотистых гетероциклических группировок: пиррольных, индольных, имидазольных и др. механизм осаждения белков алкалоидными реактивами связан с образованием нерастворимых солеобразных соединений с основными азотсодержащими группами белка. В этом соединении белок является катионом, а алкалоидный реактив – анионом. Реакции осаждения проводят в кислой среде, способствующей появлению положительного заряда на мицелле белка.

Танин — это сложный эфир глюкозы и пяти молекул метадигалловой кислоты (пентадигаллоилглюкоза). При полном гидролизе танина выделяются глюкоза и галловые кислоты.

Реактивы: раствор белка для высаливания; танин, насыщенный раствор; уксусная кислота, 1% раствор.

Ход работы: К 5 каплям раствора белка прибавляют 1-2 капли насыщенного раствора танина и 1-2 капли 1% раствора уксусной кислоты. Выпадает осадок белка желтовато-серого цвета.

Вопросы для самоконтроля:

1. Как ведут себя белки в водном растворе и в присутствии избытка кислоты или щелочи?

2. Что такое изоэлектрическая точка белка и как её определяют?

3. От чего зависит растворимость белка? Какие факторы стабилизируют белок в растворе?

4. Каковы общие механизмы осаждения белка из растворов? Какими способами можно осадить белок, не вызывая его денатурацию?

5. Что такое высаливание белков?

6. Что такое денатурация белков? Какие денатурирующие белок агенты вам известны?

7. В чем заключается разница между осаждением и денатурацией белка?

8. Каким образом можно разделить альбумины и глобулины?