3. Ксантопротеиновая реакция (Мульдера).

Принцип метода. Ксантопротеиновая реакция доказывает присутствие в белке ароматических аминокислот: триптофана, фенилаланина, тирозина. При обработке раствора белка концентрированной азотной кислотой появляется желтое окрашивание (нитрование), которое при добавлении щелочи переходит в оранжевое. Химизм реакции нитрования с образованием нитросоединения следующий:

Реактивы: раствор яичного белка; раствор тирозина 0,05 %; раствор желатина; азотная кислота концентрированная; аммиак концентрированный.

Ход работы: Берут 3 пробирки. В первую вносят 4 капли раствора тирозина, во вторую — 4 капли раствора желатина, в третью — столько же раствора яичного белка. В каждую пробирку добавляют по 2 капли азотной кислоты. Нагревают пробирки и отмечают появление желтого окрашивания. После охлаждения добавляют в каждую пробирку по 5-7 капель водного раствора аммиака, при этом желтая окраска сменяется на оранжевую.

Примечание: реакция носит название ксантопротеиновой от греческого xanthos — желтый. Реакция обеспечивает появление желтого окрашивания при попадании конц. азотной кислоты на кожу, ногти и т.д. Такую реакцию дают более простые ароматические соединения, например, фенолы. Желатин, сальмин, клупеин (протамины) дают отрицательную реакцию, так как в них отсутствуют ароматические аминокислоты.

4. Реакция Фоля.

Принцип метода. Реакция Фоля указывает на присутствие в белке аминокислот цистеина и цистина, содержащих слабосвязанную серу. Метионин, хотя и является содержащей серу аминокислотой, данной реакции не дает, поскольку сера в нем связана прочно. Реакция состоит в том, что при кипячении белка со щелочью аминокислоты цистеин и цистин легко отщепляют серу в виде сульфида металла, который с плюмбитом дает черный или бурый осадок сернистого свинца.

Реактив Фоля состоит из 5 % раствора уксуснокислого свинца и избытка 10 % раствора едкого натрия. Реакция протекает в реактиве Фоля по следующим уравнениям:

Реактивы: раствор яичного белка; реактив Фоля (к 5-10 % раствору уксуснокислого свинца добавляют раствор едкого натра до растворения).

Ход работы: к 5 каплям раствора белка добавляют 5 капель реактива Фоля. Интенсивно прокипятить и дать постоять 1-2 минуты. При этом появляется черный или бурый осадок сульфида свинца.

5. Реакция на тирозин (Миллона).

Принцип метода. При добавлении к раствору белка реактива Миллона (раствор ртути в азотной кислоте с небольшим количеством NaNO₂) при кипячении образуется кроваво-красный осадок ртутной соли динитротирозина, благодаря наличию в тирозине фенольного кольца. Химизм реакции можно предоставить следующим образом:

Следует избегать прибавления избытка реактива Миллона, так как он содержит азотную кислоту, которая, при взаимодействии с белком может дать желтое окрашивание, маскирующее реакцию Миллона.

Реактивы: раствор яичного белка; раствор фенола 0,1%; раствор желатина 1%; реактив Миллона (в 57 мл конц. азотной кислоты растворяют 40 г ртути сначала на холоде, а затем, нагревая на водяной бане; полученный раствор разбавляют 2 объемами воды, дают отстояться и сливают с осадка).

Ход работы: Берут три пробирки, в первую пробирку наливают 5 капель раствора яичного белка, во вторую — 5 капель раствора фенола, а в третью — 5 капель раствора желатина. В каждую пробирку приливают по 3 капли реактива Миллона и осторожно нагревают. В пробирке с яичным белком появляется кроваво-красное окрашивание, в пробирке с фенолом — розовато-красное, а в пробирке с желатином жидкость бесцветна, т.к. белки, не содержащие тирозина, этой реакции не дают.