1. Гидролиз нуклеопротеидов.

Для изучения химического состава нуклеопротеидов проводят кислотный гидролиз дрожжей, поскольку они очень богаты нуклеопротеидами. Специфическими реакциями для каждого вещества открывают продукты гидролиза – полипептиды, пуриновые основания, углевод и фосфорную кислоту.

Реактивы: серная кислота, 10% раствор; едкий натр, 10% раствор; медь сернокислая, 1% раствор; аммиак концентрированный; азотнокислое серебро, 1-2% раствор в аммиаке; молибденовый реактив; концентрированная серная кислота; дрожжи; тимол, 1% спиртовой раствор.

Ход работы: 2,5 г дрожжей помещают в круглодонную колбу на 100 мл, добавляют 20 мл 10% раствора серной кислоты и 20 мл дистиллированной воды. Колбу закрывают пробкой с длинной стеклянной трубкой и кипятят под тягой в течение 1-1,5 часов при слабом нагревании. Через 1,5 часа после начала кипения жидкости дают остыть, доводят в цилиндре водой до первоначального объема и фильтруют. С фильтратом проделывают качественные реакции на составные части нуклеопротеидов.

2. Качественные реакции на открытие составных частей нуклеопротеидов.

Биуретовая реакция на полипептиды. К 5 каплям гидролизата прибавляют 10-15 капель 10% раствора едкого натра и 1 каплю 1% раствора медного купороса. Жидкость окрашивается в розовый или розово-фиолетовый цвет.

Серебряная проба на пуриновые основания. К 10 каплям гидролизата добавляют по каплям крепкий раствор аммиака – приблизительно 10 капель до щелочной реакции, затем добавляют 10 капель аммиачного раствора нитрата серебра. При стоянии через 3-5 минут образуется светло-коричневый осадок серебряных солей пуриновых оснований (содержимое пробирки при стоянии перемешивать не надо). Реакция протекает по уравнению:

Качественная реакция на пентозу (Молиша). К 10 каплям гидролизата дрожжей добавляют 3 капли 1% спиртового раствора тимола, перемешивают и по стенке пробирки осторожно приливают 20-30 капель концентрированной серной кислоты. При встряхивании на дне пробирки образуется продукт конденсации фурфурола с тимолом красного цвета.

При взаимодействии концентрированной серной кислоты с гексозами или пентозами происходит их дегидратация: из пентоз образуется фурфурол, а из гексоз – оксиметилфурфурол, которые дают с тимолом продукт конденсации красного цвета:

Качественная реакция на углевод. К 5 каплям гидролизата дрожжей приливают 3 капли 0,2% спиртового раствора α-нафтола и 20 капель концентрированной серной кислоты, появляется розово-фиолетовое окрашивание.

Молибденовая проба на фосфорную кислоту. К 10 каплям гидролизата приливают 20 капель молибденового реактива и кипятят. При этом жидкость окрашивается в лимонно-желтый цвет (не осадок). Пробирку сразу охлаждают под струей холодной воды. На дне пробирки появляется кристаллический лимонно-желтый осадок фосфорномолибденовокислого аммония:

Указания к составлению отчета: полученные данные необходимо оформить в виде таблицы, в которой указать название простетической группы и химическую структуру её компонентов.

Вопросы для самоконтроля:

1. Дайте определение сложного белка.

2. Что такое нуклеопротеиды и из каких компонентов они состоят?

3. Какие простые белки входят в состав нуклеопротеидов и какова особенность их аминокислотного состава?

4. Какими качественными реакциями можно открыть продукты гидролиза нуклеиновых кислот?

5. Какие продукты образуются при гидролизе углеводной части гликопротеидов?

6. Что такое фосфопротеиды и с помощью какой реакции можно открыть их фосфорную кислоту?