Алгоритм лабораторної роботи:

1 Готують дослідну, контрольну і стандартну проби до аналізу згідно з методикою.

2 Колориметрують дослідну і стандартну проби проти контролю з використанням ФЕКу при довжині хвилі 530-560 нм.

3 Розраховують значення концентрації сечовини за формулою.

4 Інтерпретують результати дослідження згідно з клініко-діагностичним значенням визначення сечовини у сироватці крові.

Методика проведення експериментів

1 Визначення сечовини у сироватці крові

Принцип методу: сечовина утворює з діацетилмонооксимом, за наявності іонів Fe³⁺ та тіосемідкарбазиду, комплекс червоного кольору, за інтенсивністю забарвлення якого визначають її концентрацію.

Хід роботи: заповнюють 3 пробірки (відповідно до таблиці). Для зменшення похибки аналізу рекомендується дотримуватися нижчезазначеного порядку змішування розчинів.

Примітки:

1 При вмісті сечовини більше 25 ммоль/л пробу потрібно розвести дистильованою водою і повторити аналіз. Результат помножити на розведення.

2 Гемолітичні та ліпемічні сироватки депротеїнують. Для цього 0,1 мл сироватки змішують з 0,9 мл розчином трихлороцтової кислоти і центрифугують 5 хв. Таким же чином обробляють еталон. Для аналізу відбирають дослідження так само, як для сироватки без депротеїнування. Цим самим методом можна досліджувати і кров.

Реактив	Проба
	дослідна	стандартна	контрольна
Сироватка крові	0,02 мл	-	-
Еталонний розчин сечовини	-	0,02 мл	-
Н2О	-	-	0,02 мл
Розчин діацетилмонооксиму	2,00 мл	2,00 мл	2,00 мл
Розчин тіосемідкарбазиду	2,00 мл	2,00 мл	2,00 мл

Пробірки закривають алюмінієвою фольгою, вміст пробірок перемішують і кип’ятять на водяній бані рівно 10 хв. Одночасно обробляють дослідну, стандартну і контрольну проби. Потім пробірки швидко охолоджують під струменем холодної води. Колориметрують дослідну пробу та стандартну проти контролю при довжині хвилі 530-560 нм (зелений світлофільтр) у кюветі з товщиною шару 1 см. Вимірювання оптичної щільності слід проводити протягом не більше ніж 15 хв після охолодження.

Якщо після нагрівання розчин у першій пробірці каламутний, то його центрифугують протягом 5 хв або депротеїнують розчином трихлороцтової кислоти.

Розрахунок. Концентрацію сечовини розраховують за формулою

Едос

С = · 16,64 ммоль/л,

Еет

де - С - кнцентрація сечовини;

Едос - оптична щільність дослідної проби;

Еет - оптична щільність еталонної проби.

Клініко-діагностичне значення

Нормальний вміст сечовини:

• у сироватці крові 3,3-8,3 ммоль;

• у сечі 333-583 ммоль/добу, 20-35 г/добу.

Підвищення показника спостерігається при серцевій недостатності, підвищеному діурезі або потовиділенні, шокових станах, підвищеному катаболізмі білків, дієті з високим вмістом білків, гострих і хронічних захворюваннях нирок.

Зниження показника спостерігається при дієті з низьким вмістом білків і високим - вуглеводів, вагітності, акромегалії, парентеральному харчуванні, тяжких захворюваннях печінки, порушенні всмоктування.

Після проведення експериментальної частини роботи ви повинні оформити протокол лабораторної роботи.

Виконайте завдання та перевірте правильність їх вирішення з еталоном відповіді.

Завдання 1

Аміак - дуже отруйна речовина, особливо для нервової системи. Яка сполука бере особливо активну участь у знешкодженні аміаку в тканинах мозку?

A. Лізин.

B. Глутамінова кислота.

C. Пролін.

D. Гістидин.

E. Аланін.

Еталон відповіді: В.

Завдання 2

У сечі новонароджених визначаються цитрулін та високий рівень аміаку. Утворення якої речовини найімовірніше порушене?

A. Аміаку.