1.1 Визначення активності аспартатамінотрансферази
Хід роботи: роботу виконують у відповідності до таблиці.
Реактив |
Дослідна проба, мл |
Контрольна проба, мл |
Субстратна суміш (аспарагінова кислота + + α-кетоглутарова кислота) |
0,5 |
0,5 |
У термостат на 5 хв при 370С |
||
Сироватка крові |
0,1 |
- |
Н2О (дист.) |
- |
0,1 |
У термостат на 30 хв при 370С |
||
2,4-ДФГ |
0,5 |
0,5 |
У термостат на 20 хв при 250С |
||
0,4н NаОН |
5 |
5 |
Робочий реактив |
3,0 |
3,0 |
Примітка. Ретельно перемішують; 10 хв при 250С (для утворення забарвлення). Оптичну щільність вимірюють на ФЕКу при λ=500-560 нм (зелений світлофільтр проти контролю в кюветах з товщиною шару 10 мм) |
||
Розрахунок активності ферменту виконують за формулою
Х = Е · 133 од/мл,
де - Х - активність ферменту;
Е - екстинкція;
133 - коефіцієнт перерахунку.
1 мкг ПВК - 0,015 од. Е; 1 од. Е - 133 мкг ПВК, або за калібрувальним графіком. Активність виражають в умовних одиницях з розрахунку на 1 мл сироватки. 1 од. АсАТ відповідає такій активності ферменту, яка здатна за даних умов утворювати 1 мкг піровиноградної кислоти. При обчисленні активності ферменту необхідно враховувати і розведення сироватки:
Х = а · 10,
де Х - одиниця ферменту;
10 - перерахунок на 1 мл;
а - кількість ПВК, визначена за калібрувальним графіком, мкг.
У сироватці здорових людей активність АсАТ, визначена за допо-могою даного методу, коливається від 5 до 40 од./мл (0,1 - 0,5 мкм/мл). Перерахунок активності ферменту в мікромолі ПВК, що утворилася при інкубації 1 мл сироватки протягом 1год при 370С, проводять за формулою
а · 10 · 2
АсАТ
= ,
88
де а - кількість ПВК, визначена за калібрувальним графіком, мкг;
88 - маса 1 мкмоля ПВК, мкг;
10 - коефіцієнт перерахунку на 1 мл сироватки;
2 - тільки для АлАТ - коефіцієнт перерахунку на 1 год інкубації.
1.2 Визначення активності аланінамінотрансферази
Хід роботи: визначення активності АлАТ проводять аналогічно до АсАТ, за винятком того, що беруть іншу субстратну суміш (аланін і α-кетоглутарат).
Розрахунок активності виконується за готовою калібрувальною кривою. Для розрахунку активності АлАТ і перерахунку її в мікромолі піровиноградної кислоти використовують ті самі формули, що й для АсАТ. Одна одиниця АлАТ відповідає такій активності ферменту, яка здатна за даних умов досліду утворювати 1 мкг ПВК. У сироватці крові здорових людей активність АлАТ, визначена за допомогою даного методу, коливається у межах 5-30 од./мл (0,1-0,7 мкм/мл).
Клініко-діагностичне значення
У нормі:
активність АсАТ сироватки крові становить 0,1 - 0,45 мкмоль/год∙мл,
АлАТ - 0,1 - 0,68 мкмоль/год∙мл.
АсАТ і АлАТ зарекомендували себе як найбільш чутливі індика-тори пошкодження паренхіми печінки (особливо АлАТ). Активність АлАТ, що перевищує у 10 і більше разів верхню межу норми, спостерігають переважно при гострих гепатитах (вірусному і токсичному); підвищення активності ферменту у 5-10 разів характерне для гострих (вірусного, алкогольного, медикаментозного) гепатитів, загострення хронічного активного гепатиту і пухлин печінки. Показники, що перевищують нормальні у 1,5-5 разів, спостерігаються при всіх перелічених вище захворюваннях, а також у перший тиждень гострої обтурації загальної жовчної протоки.
Активність АсАТ змінюється подібно до АлАТ, але з меншими потенційними можливостями (менша частина виявлення і більш низький рівень зміни активності).
Визначення активності амінотрансфераз у сироватці крові має виключно важливе значення для діагностики захворювань серця. При інфаркті міокарда активність АсАТ підвищується у 10-100 разів порівняно з нормою. У початковому періоді інфаркту міокарда через 24-36 год воно чітко виражене і лише на 3-7-й день активність ферменту нормалізується. Зміни АлАТ при цьому невеликі.
Виконайте завдання та перевірте правильність їх вирішення з еталоном відповіді.
Завдання 1
Біогенні аміни: гістамін, серотонін, дофамін та ін. - дуже активні речовини, які впливають на різноманітні фізіологічні функції організму. У результаті якого процесу утворюються біогенні аміни у тканинах організму?
А. Декарбоксилювання амінокислот.
В. Дезамінування амінокислот.
С. Трансамінування амінокислот.
Д. Окиснення амінокислот.
Е. Відновного реамінування.
Еталон відповіді: А.
Завдання 2
Яка із сполук є акцептором аміногруп у реакціях трансамінування амінокислот?
А. Аргініносукцинат.
В. α-Кетоглутарат.
С. Лактат.
Д. Цитрулін.
Е. Орнітин.
Еталон відповіді: В.
Завдання 3
Цикл Кребса відіграє важливу роль у реалізації глюкопластичного ефекту амінокислот. Це зумовлено обов’язковим перетворенням їх безазотистого залишку на:
А. Малат.
В. Оксалоацетат.
С. Сукцинат.
Д. Фумарат.
Е. Цитрат.
Еталон відповіді: В.
Завдання 4
До лікарні швидкої медичної допомоги доставили дитину 7 років у стані алергійного шоку, який розвинувся після укусу оси. У крові - підвищена концентрація гістаміну. У результаті якої реакції утворюється цей амін?
А. Відновлення.
В. Гідроксилювання.
С. Дегідрування.
Д. Дезамінування.
Е. Декарбоксилювання.
Еталон відповіді: Е.
Завдання 5
При декарбоксилюванні амінокислоти гістидину утворюється надзвичайно активний амін - медіатор запалення та алергії, а саме:
А. Серотонін.
В. Гістамін.
С. Дофамін.
Д. ГАМК.
Е. Триптамін.
Еталон відповіді: В.
Завдання 6
Назвіть, яка із сполук є акцептором аміногруп в реакціях трансамінування:
А. α-Кетоглутарат.
В. Аргініносукцинат.
С. Лактат.
Д. Цитрулін.
Е. Орнітин.
Еталон відповіді: А.
Завдання 7
Кухар у результаті необережності опік руку паром. Підвищення концентрації якої речовини викликало почервоніння, набряклість, болючість ураженої ділянки?
А. Гістаміну.
В. Тіаміну.
С. Глутаміну.
Д. Лізину.
Е. Галактозаміну.
Еталон відповіді: А.
Завдання 8
При декарбоксилюванні глутамату в ЦНС утворюється медіатор гальмування. Назвіть його.
А. ГАМК.
В. Глутатіон.
С. Гістамін.
Д. Серотонін.
Е. Аспарагін.
Еталон відповіді: А.
Завдання 9
За клінічними показниками хворому призначено піридоксаль-фосфат. Для корекції яких процесів рекомендований цей препарат?
А. Трансамінування і декарбоксилювання амінокислот.
В. Окисного декарбоксилювання кетокислот.
С. Дезамінування пуринових нуклеотидів.
Д. Синтезу пуринових і піримідинових основ.
Е. Синтезу білка.
Еталон відповіді: А.
Завдання 10
В організмі людини амінокислоти дезамінуються шляхом транс- амінування, внаслідок чого аміногрупа переноситься на:
А. α-Кетоглутарат.
В. Сукцинат.
С. Цитрат.
Д. Фумарат.
Е. Малат.
Еталон відповіді: А.
Завдання 11
У хворого через 12 годин після гострого нападу загруднинного болю виявлено різке підвищення активності АсАТ у сироватці крові. Назвіть патологію, для якої характерна ця зміна.
А. Інфаркт міокарда.
В. Вірусний гепатит.
С. Колагеноз.
Д. Цукровий діабет.
Е. Нецукровий діабет.
Еталон відповіді: А.
Короткі методичні вказівки до роботи студентів на практичному занятті
Заняття починається з вирішення навчальних завдань, після чого необхідно виконати досліди лабораторної роботи.
У кінці заняття проводяться тестовий контроль, аналіз результатів роботи, у яких беруть участь всі студенти під керівництвом викладача.