Теоретичні питання

1. Біосинтез пуринових нуклеотидів: схема утворення ІМФ. Джерела окремих атомів у молекулі пурину.

2. Утворення АМФ, ГМФ, АТФ, ГТФ.

3. Регуляція синтезу пуринових нуклеотидів.

4. Біосинтез пуринових нуклеотидів із азотистих основ.

5. Біосинтез піримідинових нуклеотидів: реакції утворення УМФ, УДФ, УТФ та ЦТФ.

6. Регуляція синтезу піримідинових нуклеотидів.

7. Біосинтез дезоксирибонуклеотидів. Утворення тимідинових нукле-отидів, інгібітори біосинтезу дТМФ як протипухлинні засоби.

8. Катаболізм нуклеотидів. Реакції розщеплення пуринових нуклео-тидів. Схема катаболізму піримідинових нуклеотидів.

9. Спадкові порушення метаболізму нуклеотидів. Подагра. Синдром Леша-Ніхана. Оротатацидурія.

На занятті ви повинні будете виконати експериментальну частину роботи згідно з алгоритмом лабораторної роботи та методикою її проведення.

Алгоритм лабораторної роботи:

1. За стандартною методикою готують дослідну, стандартну та контрольну проби з урахуванням тривалості усіх етапів підго-товки (інкубації впродовж 10 хв при 20-25⁰С і центрифугування - 10 хв, 3000 об./хв).

2. Після етапу центрифугування при підготовці дослідної проби використовують центрифугат і далі проводять підготовку всіх проб згідно з методикою.

3. Вимірюють екстинкцію дослідної і стандартної проб проти контрольної у кюветі з товщиною шару 1 см при довжині хвилі 500-700 нм (червоний світлофільтр).

4. Розрахунок концентрації сечової кислоти проводять за формулою.

5. Інтерпретують результати згідно з клініко-діагностичним значенням визначення сечової кислоти у крові.

Методика проведення експерименту Визначення вмісту сечової кислоти у сироватці крові

Принцип методу: сечова кислота відновлює фосфорно-вольфрамовий реактив з утворенням комплексу блакитного кольору. Інтенсивність забарвлення пропорційна концентрації сечової кислоти.

Хід роботи: аналіз проводиться відповідно до таблиці.

Реактив	Проба
	дослідна, мл	стандартна, мл	контрольна, мл
Дистильована вода	4,0	4,0	4,5
Сироватка крові	0,5	-	-
Стандартний розчин сечової кислоти	-	0,5	-
Кислота сірчана (0,35М)	0,25	0,25	0,25
Вольфрамат натрію	0,25	0,25	0,25
Перемішують, 10 хв витримують при 20-250С, центрифугують 10 хв при 3000 об./хв
Центрифугат (тільки для дослідної проби)	3,0	3,0	3,0
Розчин карбонату натрію	1,5	1,5	1,5
Фосфатно-вольфрамо-вий реактив	1.	.1	1
Примітка. Перемішують, витримують 30 хв при 20-250С, вимірюють екстинкцію (Ед та Ест) проти контрольної проби у кюветі з товщиною шару 1 см при довжині хвилі 500-700 нм (червоний світлофільтр)

Розрахунок проводять за формулою

Ед

Х = · С ,

Ест

де Х - концентрація сечової кислоти, ммоль/л;

Ед - екстинкція дослідної проби;

Ест - екстинкція стандартної проби;

С - концентрація сечової кислоти у стандартному розчині (0,3 ммоль/л).

Клініко-діагностичне значення. Рівень сечової кислоти у крові лабільний, пов’язаний з такими факторами, як вік, стать, вживання алкоголю, куріння тощо.

Нормальні значення: чоловіки - 0,12-0,38 ммоль/л;

жінки - 0,12 - 0,46 ммоль/л.

Гіперурикемія спостерігається при: подагрі, захворюваннях нирок (ниркова недостатність, полікістоз нирок тощо), синдромі Леша-Най-хана; гостре зростання рівня сечової кислоти спостерігається після лікування лейкозів цитотоксичними препаратами.

Гіпоуремія спостерігається при хворобі Вільсона-Коновалова, деяких злоякісних захворюваннях (лімфогранулематоз, бронхогенний рак) тощо.

Після проведення експериментальної частини роботи ви повинні оформити протокол лабораторної роботи.

Виконайте завдання та перевірте правильність їх вирішення з еталоном відповіді.

Завдання 1

У крові 12-річного хлопчика – зниження концентрації сечової кислоти і накопичення ксантину та гіпоксантину. Про генетичний дефект якого ферменту це свідчить?

А. Аргінази.

В. Ксантиноксидази.

С. Уреази.

Д. Орнітин-карбамоїлтрансферази.

Е. Гліцеролкінази.

Еталон відповіді: В.

Завдання 2

У клініку прийнятий хворий з підозрою на подагру. Який біохімічний аналіз потрібно провести для уточнення діагнозу?

А. Визначення вмісту амінокислот у крові.

В. Визначення концентрації сечовини у крові та сечі.

С. Визначення рівня креатину у крові.

Д. Визначення активності урикази у крові.

Е. Визначення рівня сечової кислоти у крові та сечі.

Еталон відповіді: Е.

Завдання 3

У хлопчика 8 років хвороба Леша-Ніхана. У крові – збільшена концентрація сечової кислоти. Порушення якого процесу є причиною цього спадкового захворювання?

А.Утворення дезоксирибонуклеотидів.

В. Синтезу пуринових нуклеотидів.

С. Синтезу піримідинових нуклеотидів.

Д. Розпаду піримідинових нуклеотидів.

Е. Розпаду пуринових нуклеотидів.

Еталон відповіді: Е.

Завдання 4

Чоловік 58 років, переніс операцію з приводу раку передміхурової залози. Через 3 місяці йому провели курс променевої та хіміотерапії. До комплексу лікарських препаратів входив 5-фтордезоксиуридин – інгібітор тимідилатсинтази. Синтез якої речовини в першу чергу блокується під дією цього препарату?

А. Білка.

В. іРНК.

С. рРНК.

Д. тРНК.

Е. ДНК.

Еталон відповіді: Е.

Завдання 5

Чоловік 65 років який страждає на подагру, скаржиться на біль у ділянці нирок. При ультразвуковому обстеженні встановлено наяв-ність ниркових каменів. Підвищення концентрації якої речовини є найбільш імовірною причиною утворення каменів у цьому разі?

А. Сечової кислоти.

В. Холестерину.

С. Білірубіну.

Д. Сечовини.

Е. Цистину.

Еталон відповіді: А.

Завдання 6

Жінка 40 років звернулася до лікаря зі скаргами на біль у дрібних суглобах ніг і рук. Суглоби збільшені, мають вигляд потовщених вузлів. У сироватці крові – підвищений вміст уратів. Причиною є порушення обміну:

А. Амінокислот.

В. Пуринів.

С. Вуглеводів.

Д. Ліпідів.

Е. Піримідинів.

Еталон відповіді: В.

Завдання 7

Хворому на подагру лікар призначив алопуринол. Яка фармако-логічна властивість алопуринолу забезпечує терапевтичний ефект у цьому випадку.

А. Прискорення катаболізму піримідинових нуклеотидів.

В. Збільшення швидкості виведення азотовмісних речовин.

С. Конкурентне інгібування ксантиноксидази.

Д. Уповільнення реутилізації піримідинових нуклеотидів.

Е. Прискорення синтезу нуклеїнових кислот.

Еталон відповіді: С.

Завдання 8

Чоловік 46 років звернувся до лікаря зі скаргами на біль у дрібних суглобах, який загострився після вживання м’ясної їжі. У хворого діагностовано сечокам’яну хворобу з накопиченням сечової кислоти. Цьому пацієнту призначено алопуринол, який є конкурентним інгібітором ферменту:

А. Ксантиноксидази.

В. Уреази.

С. Аргінази.

Д. Дигідроуридилдегідрогенази.

Е. Карбамоїлсинтетази.

Еталон відповіді: А.

Завдання 9

Для лікування злоякісних пухлин призначають метотрексатструк-турний аналог фолієвої кислоти, який є конкурентним інгібітором дигідрофолатредуктази і тому пригнічує синтез:

A. Нуклеотидів.

B. Моносахаридів.

C. Жирних кислот.

D. Гліцерофосфатидів.

E. Глікогену.

Еталон відповіді: А.

Завдання 10

Локалізована в цитоплазмі карбамоїлфосфатсинтетаза ІІ каталізує реакцію утворення карбамоїлфосфату не з вільного аміаку, а з глютаміну. Цей фермент постачає карбамоїлфосфат для синтезу:

A. Піримідинів.

B. Пуринів.

C. Сечовини.

D. Ліпідів.

E. Амінокислот.

Еталон відповіді: А.

Завдання 11

При спадковій оротацидурії виділення оротової кислоти в багато разів перевищує норму. Синтез яких речовин буде порушений при цій патології?

A. Піримідинових нуклеотидів.

B. Пуринових нуклеотидів.

C. Біогенних амінів.

D. Сечової кислоти.

E. Сечовини.

Еталон відповіді: А.

Завдання 12

Похідні птерину – аміноптерин і метатрексат – є конкурентними інгібіторами дигідрофолатредуктази, внаслідок чого вони пригнічу-ють регенерацію тетрагідрофолієвої кислоти з дигідрофолату. Ці лікарські засоби призводять до гальмування міжмолекулярного транс-порту одновуглецевих груп. Біосинтез якого нуклеотиду при цьому пригнічується?

A. дТМФ.

B. ІМФ.

C. УМФ.

D. ОМФ.

E. АМФ.

Еталон відповіді: А.

Завдання 13

На прийом до терапевта прийшов чоловік 37 років зі скаргами на періодичні інтенсивні больові приступи у суглобах великого пальця стопи та їх припухлість. При аналізі сечі встановлено її різко кислий характер і рожеве забарвлення. З наявністю яких речовин це може бути пов’язане?

A. Солі сечової кислоти.

B. Хлориди.

C. Амонієві солі.

D. Фосфат кальцію.

E. Сульфат магнію.

Еталон відповіді: А.

Завдання 14

У дитини спостерігається відставання у рості і розумовому розвитку, з сечею виділяється велика кількість оротової кислоти. Ця спадкова хвороба розвивається внаслідок порушень:

A. Синтезу піримідинових нуклеотидів.

B. Розпаду піримідинових нуклеотидів.

C. Синтезу пуринових нуклеотидів.

D. Розпаду пуринових нуклеотидів.

E. Перетворення рибонуклеотидів у дезоксирибонуклеотиди.

Еталон відповіді: А.

Завдання 15

Хворий 46 років звернувся до лікаря зі скаргою на біль у суглобах, що посилюється напередодні зміни погоди. У крові виявлено підвищення концентрації сечової кислоти. Посилений розпад якої речовини є найімовірнішою причиною?

A. АМФ.

B. ЦМФ.

C. УТФ.

D. УМФ.

E. ТМФ.

Еталон відповіді: А.

Короткі методичні вказівки до роботи студентів на практичному занятті

Заняття починається з вирішення навчальних завдань, після чого необхідно виконати досліди лабораторної роботи.

У кінці заняття проводяться тестовий контроль, аналіз результатів роботи, в яких беруть участь всі студенти під керівництвом викладача.