- •Заняття 27
- •При підготовці до заняття користуйтеся такою літературою:
- •1.1 Визначення активності аспартатамінотрансферази
- •1.2 Визначення активності аланінамінотрансферази
- •Технологічна карта проведення практичного заняття
- •Граф логічної структури теми “Метаболізм простих білків і амінокислот. Загальні шляхи перетворення амінокислот”
- •Алгоритм лабораторної роботи:
- •1 Визначення сечовини у сироватці крові
- •B. Сечової кислоти.
- •Еталон відповіді: а.
- •Еталон відповіді: а.
- •Технологічна карта проведення практичного заняття
- •Граф логічної структури теми “Обмін аміаку в організмі людини. Детоксикація аміаку. Синтез сечовини”
- •Тема. Спеціалізовані шляхи обміну ациклічних та циклічних амінокислот. Синтез глутатіону та креатину
- •1 Пояснювати метаболічні схеми перетворень окремих амінокислот
- •Алгоритм лабораторної роботи:
- •A. Триптофану.
- •Технологічна карта проведення практичного заняття
- •Граф логічної структури теми “Спеціалізовані шляхи обміну ациклічних та циклічних амінокислот. Синтез глутатіону та креатиніну”
- •Тема. Порушення азотистого обміну
- •Алгоритм виконання аналізу:
- •Технологічна карта проведення практичного заняття
- •Граф логічної структури теми “Порушення азотистого обміну”
- •Заняття 31 Тема. Вивчення механізмів біосинтезу порфіринів
- •Теоретичні питання
- •Алгоритм лабораторної роботи:
- •Методика проведення експерименту
- •1 Якісна проба Майзера і Граніна на виявлення у сечі попередників порфіринів, порфобіліногену
- •2 Напівкількісний метод визначення копропорфіринів (кп) за Резніком і Федоровим
- •Технологічна карта проведення практичного заняття
- •Граф логічної структури теми “Вивчення механізмів біосинтезу порфіринів”
- •Порфірини
- •Тема. Дослідження біосинтезу і катаболізму пуринових та піримідинових нуклеотидів. Визначення кінцевих продуктів їх обміну
- •Теоретичні питання
- •Алгоритм лабораторної роботи:
- •Методика проведення експерименту Визначення вмісту сечової кислоти у сироватці крові
- •Технологічна карта проведення практичного заняття
- •Граф логічної структури теми “Дослідження біосинтезу і катаболізму пуринових та піримідинових нуклеотидів. Визначення кінцевих продуктів їх обміну”
- •Метаболізм нуклеотидів
- •При підготовці до заняття користуйтеся такою літературою:
- •Технологічна карта проведення практичного заняття
- •Граф логічної структури теми “Дослідження реплікації днк і транскрипції рнк”
- •При підготовці до заняття користуйтеся такою літературою:
- •Технологічна карта проведення практичного заняття
- •Граф логічної структури теми “Біосинтез білка в рибосомах. Етапи та механізм трансляції, регуляція трансляції. Антибіотики - інгібітори транскрипції та трансляції”
- •При підготовці до заняття користуйтеся такою літературою:
- •Технологічна карта проведення практичного заняття
- •Граф логічної структури теми “Регуляція експресії генів у прокаріотів та еукаріотів. Молекулярні механізми мутацій. Репарація днк. Рекомбінантні днк”
- •Тема. Дослідження молекулярно-клітинних механізмів дії гормонів білково-пептидної природи, катехоламінів та стероїдів
- •1 Характеризувати основні класифікації гормонів.
- •Технологічна карта проведення практичного заняття
- •Граф логічної структури теми “Дослідження молекулярно-клітинних механізмів дії гормонів білково-пептидної природи, катехоламінів та стероїдів”
- •Алгоритм лабораторної роботи:
- •1.1 Біуретова реакція
- •1.2 Реакція з оцтовокислим свинцем
- •Еталон відповіді: е.
- •Еталон відповіді: е.
- •Технологічна карта проведення практичного заняття
- •Граф логічної структури теми “Вивчення біохімічних ефектів білково-пептидних гормонів і гормонів травного каналу”
- •Алгоритм лабораторної роботи
- •1 Якісна реакція на тироксин
- •2 Якісна реакція на адреналін
- •2.1 Реакція з хлорним залізом
- •2.2 Діазореакція
- •2.3 Флюоресценція продуктів окиснення адреналіну
- •Еталон відповіді: а.
- •Еталон відповіді: а.
- •Технологічна карта проведення практичного заняття
- •Граф логічної структури теми “Дослідження гормональної регуляції метаболізму та клітинних функцій гормонів щитоподібної залози і катехоламінів. Біохімічні ефекти ейкозаноїдів”
- •Алгоритм лабораторної роботи:
- •1 Визначення вмісту кальцію в сироватці крові
- •Граф логічної структури теми “Дослідження біохімічних ефектів стероїдних гормонів. Дослідження гормональної регуляції гомеостазу кальцію та фосфору в організмі”
- •При підготовці до заняття користуйтеся такою літературою:
- •Технологічна карта проведення практичного заняття
- •Граф логічної структури теми “Контроль засвоєння змістових модулів “Обмін білків. Молекулярна біологія. Біохімія міжклітинних комунікацій”
- •Біохімічні дослідження крові (плазма, сироватка)
- •Продовження таблиці а.1
- •Продовження таблиці а.1
- •Список літератури
Теоретичні питання
Порфірини: номенклатура, структура.
Реакції біосинтезу порфіринів. Синтез протопорфірину ІX. Утво-рення гему.
Регуляція синтезу порфіринів.
Спадкові порушення обміну порфіринів (ензимопатія): еритропое-тична порфірія, печінкова порфірія, неврологічні порушення, фото- дерматити.
Принципи методів та КДЗ визначення порфіринів.
На занятті ви повинні будете виконати експериментальну частину роботи згідно з алгоритмом лабораторної роботи та методикою її проведення.
Алгоритм лабораторної роботи:
За допомогою реактиву Ерліха визначають наявність порфо-біліногену в сечі (позитивний результат - вишнево-червоне забарвлення.
Додають хлороформ для визначення наявності уробіліногену і порфіринів.
Використовують метод флуоресценції для визначення концентрації копропорфіринів у сечі.
Методика проведення експерименту
1 Якісна проба Майзера і Граніна на виявлення у сечі попередників порфіринів, порфобіліногену
Принцип методу: порфобіліноген (ПБГ) реагує з n-диметиламіно-бензальдегідом (ДАБ) з утворенням забарвленої в червоний колір сполуки. Сполуки, які дають аналогічну реакцію з ДАБ (уробіліноген, індол, скатол тощо), визначають екстракцією хлороформом, в якому ПБГ не розчиняється.
Хід роботи: у пробірку вносять 2 мл свіжої сечі, додають 2 мл ре-активу Ерліха (2% розчин n-диметиламінобензальдегіду в 4н розчині соляної кислоти). З’являється вишнево-червоне забарвлення, яке свідчить про наявність порфобіліногену.
Для виключення можливої наявності в сечі уробіліногену до суміші сечі і реактиву додають таку саму кількість хлороформу.
Поява забарвлення в нижньому хлороформному шарі свідчить про наявність уробіліну. Якщо забарвлений верхній водяний шар, то в сечі наявні порфірини.
2 Напівкількісний метод визначення копропорфіринів (кп) за Резніком і Федоровим
Примітка. Результати дослідів 1-2 оформити у вигляді таблиці
Номер пробірки |
Копропорфірини |
Порфобіліноген |
1 |
|
|
2 |
|
|
3 |
|
|
Принцип методу: метод ґрунтується на екскреції копро- порфіринів у кислому середовищі ефіром з подальшим опроміненням УФ-світлом. За інтенсивністю флуоресценції верхнього шару рідини визначають копропорфірини відповідно до шкали.
Хід роботи: у пробірку з притертою пробкою вносять 1 мл сечі, 1 краплю льодяної оцтової кислоти (до кислої реакції за лакмусовим папірцем) і додають 1 мл ефіру. Вміст пробірки енергійно струшують 3-5 хв.
Після відстоювання і розділення спостерігають флуоресценцію у верхньому шарі, вміщуючи пробірку в потік УФ-світла.
Шкала визначення копропорфіринів:
1 бал (блакитна флуоресценція) - нормальний вміст КП;
2 бали (ледь помітна рожева флуоресценція) - незначне збільшення концентрації КП;
3 бали (чітка рожева флуоресценція) - середнє збільшення концентрації КП;
4 бали (слабка рожева флуоресценція) - сильне збільшення концентрації КП;
5 балів (чітка червона флуоресценція) - значне збільшення концентрації КП.
Клініко-діагностичне значення. Захворювання, при яких виявлені порушення обміну порфіринів, умовно поділяють на 2 групи: порфірії і порфіринурії. Порфірії - це група спадкових захворювань, що виникають внаслідок дефіциту ферментів порфіри нового синтезу. Порфіринурії - це порушення обміну порфіринів, які виникають повторно внаслідок основного захворювання.
Поява у сечі копропорфіринів, ПБГ та інших попередників порфіринів спостерігається при різних формах порфірій залежно від етапу, на якому порушений синтез гему. Наприклад, при печінковій порфірії в сечі значно збільшений вміст ПБГ і Д-АЛК; при еритропоетичній уропорфірії (порфірії Гюнтера) різко збільшений вміст УПГ І і КПГ І.
Після проведення експериментальної частини роботи ви повинні оформити протокол лабораторної роботи.
Виконайте завдання та перевірте правильність їх вирішення з еталоном відповіді.
Завдання 1
Мати звернулася до лікаря: у дитини 5 років під дією сонячних променів на шкірі з’являються еритеми, везикулярний висип, дитина скаржиться на свербіж. Дослідження крові виявили зменшення вмісту заліза в сироватці крові, збільшення виділення з сечею уропорфі-риногену І. Найбільш імовірною спадковою патологією в дитини є:
А. Копропорфірія.
В. Метгемоглобінемія.
С. Печінкова порфірія.
Д. Еритропоетична порфірія.
Е. Інтермітуюча порфірія.
Еталон відповіді: Д.
Завдання 2
У пацієнта візуально виявлено пухирі та посилену пігментацію після впливу УФ-променів. Сеча після стояння набуває червоного кольору. Виявлення у сечі якого з перелічених показників дасть змогу верифікувати хворобу Гюнтера?
А. Ацетону.
В. Гемоглобіну.
С. Білірубіну.
Д. Креатиніну.
Е. Уропорфіриногену І.
Еталон відповіді: Е.
Завдання 3
Пацієнт 33 років хворіє 10 років. Періодично звертається до лікаря зі скаргами на гострий біль у животі, судоми, порушення зору. У його родичів спостерігаються подібні симптоми. Сеча червоного кольору. Госпіталізовано з діагнозом: гостра переміжна порфірія. Причиною захворювання може бути порушення біосинтезу:
А. Інсуліну.
В. Гему.
С. Жовчних кислот.
Д. Простагландинів.
Е. Колагену.
Еталон відповіді: В.
Завдання 4
Жінка 43 років - робітниця лакофарбового підприємства - скар-житься на загальну слабість, зниження маси тіла, апатію, сонливість. Хроніч-ну свинцеву інтоксикацію підтверджено лабораторно – виявлено гіпо-хромну анемію. У крові – підвищений рівень протопорфірину і зниже-ний рівень δ-амінолевулінової кислоти, що свідчить про порушення синтезу:
А. ДНК.
В. Гему.
С. РНК.
Д. Білка.
Е. Мевалонової кислоти.
Еталон відповіді: В.
Завдання 5
У хворого відмічається підвищена чутливість шкіри до сонячних променів. При стоянні сеча набуває темно-червоного кольору. Яка найбільш імовірна причина такого стану?
А. Алкаптонурія.
В. Гемолітична жовтяниця.
С. Альбінізм.
Д. Пелагра.
Е. Порфірія.
Еталон відповіді: Е.
Завдання 6
У хворого відмічається підвищена чутливість шкіри до сонячного світла. При стоянні сеча набуває темно-червоного кольору. Яка найбільш імовірна причина такого стану?
А. Порфірія.
В. Гемолітична жовтяниця.
С. Альбінізм.
Д. Пелагра.
Е. Алкаптонурія.
Еталон відповіді: А.
Короткі методичні вказівки до роботи студентів на практичному занятті
Заняття починається з вирішення навчальних завдань, після чого необхідно виконати досліди лабораторної роботи.
У кінці заняття проводяться тестовий контроль, аналіз результатів роботи, в яких беруть участь всі студенти під керівництвом викладача.