2.1.2. Методика проведения исследования с помощью дафний магна (Daphnia magna Straus)

2.1.2.1. Культивирование дафний

Для токсилогических исследований надо иметь чистую культуру самок. Для культивирования отбирались по 40 самок из природного водоема и помещались в 3 сосуда емкостью 3 литра. Во избежание гибели рачков проводилось адаптирование к лабораторным условиям, постепенно добавляя новую воду. Культуру дафний требуется выращивать при плотности популяции не более 25 крупных особей на 1 л воды. Кормление производилось через каждые сутки растертым и растворенным вареным желтком яйца. Один раз в неделю накопившийся на дне осадок удалялся стеклянной трубочкой и добавлялась вода. Выращивали дафний при температуре +18°С - + 20°С и освещении лампами в 400-600 люкс (40 ватт) в течении 8 часов в сутки.

2.1.2.2. Подготовка дафний к биотестированию

Для более точных токсикологических опытов использовалось поколение от одной самки, чем обеспечивалась генетическая однородность материала и максимально исключалась возможность разброса полученных данных за счет индивидуальной изменчивости. 20 одновозрастных половозрелых самок отсаживалось по одной в стаканы с водой на 250 мл, куда вносился корм. После появления молоди (каждая самка может выметать от 10 до 40 молодых дафний)взрослые особи удалялись при помощи стеклянной трубки. Однодневную молодь мы использовали для получения следующего поколения, которое и непосредственно использовали для биотестирования. Брались рачки 2-4 дневного возраста из стакана, в котором их появилось больше и переносили в емкость на 3 л, где производилось дальнейшее культивирование. Для опытов использовался второй помет. Плотность посадки такая же, как и для взрослых дафний(20-25 рачков на 1 л воды).

2.1.2.3. Подготовка воды

Для культивирования дафний и для контроля бралась вода средней жесткости (2,5-5,3 экв/л) с нейтральной реакцией среды (рН=7). Водопроводная вода подвергается химической обработке – содержит коагулянты, свободный хлор и др. Для удаления хлора и других примесей, помимо отстаивания, вода пропускалась через гранулированный активированный уголь. Затем отстаивалась, профильтровывалась, выдерживалась в аквариуме с рыбами. В результате получилась вода удовлетворительного качества.

2.1.2.4. Проведение эксперимента и оценка результата

Методика проведения исследования заимствована у авторов А.И.Федоровой и А.Н.Никольской и апробирована при подготовке специалистов факультета географии и геоэкологии Воронежского государственного университета (Федорова А. И., 2001г.).

При постановке опытов по определению острой токсичности вод учитывалось влияние среды во время проведения экспериментов: состав воды, рH, жесткость, температура. Вода для исследования взята из водоемов рек в том месте, где она визуально наиболее чистая

Пробы(Приложение 2) воды были взяты в июне 2010 и 2011 гг. в реках

Кума :

• проба 1 - район ул. Кумской;

• проба 2 - район мотодрома;

• проба 3 – район пер. Пляжного

и Мокрый Карамык:

• проба 1 - район Ткацкой фабрики (ул.50-летия Октября);

• проба 2 - район ул. Ленинградской;

• проба 3 – район ул. Тифлисской.

Наливалась в стаканы вода каждой из рек, взятая в нескольких (в 3 точках) местах(по 250 мл в трехкратной повторности). Контроль – очищенная вода. В каждый стакан помещались по 10 рачков в возрасте 2-4 суток. Для этого пипеткой с широким концом отлавливались дафнии из сосуда, где они выращивались, и помещались на часовое стекло. Тонкой пипеткой отсасывалась вода со стекла и дафнии смывались в приготовленный стакан, используя жидкость из этого же стакана. Дафнии помещались в контрольные и опытные стаканы. При проведении опыта кормление не производили.

По истечении 1, 2, 4, 8, 24, 48 часов снимались результаты опытов, учитывая при этом число живых особей, их поведение(активность и характер передвижения), степень наполнения кишечника пищей, количество сброшенных эфиппиумов(при действии токсического агента нарушаются метаболические процессы у особей и, как реакция на токсикант, происходит линька и сбрасывание эфиппиума). Те животные, которые в течение нескольких секунд после легкого встряхивания стакана не начинают двигаться вновь, считаются погибшими, несмотря на то, что у них могут двигаться антенны.

При осмотре стаканов погибшие особи удалялись пипеткой, начиная с наименее концентрированного раствора, после чего пипетка тщательно промывалась. Для контроля была отдельная пипетка. Полученные данные записывались в дневники наблюдений(Приложение 10)Результаты, полученные во всех повторностях, суммировали, нашли среднее значение всех изучаемых характеристик. Полученные данные сравнивались с контрольными. На основании результатов опытов сделаны выводы о качестве воды в реках города.

Сроки проведения исследования – июнь-июль 2010 и 2011 г..