6. Фармакокинетика доксорубицина после введения больным с лимфопролиферативными заболеваниями доксорубицина, связанного с эритроцитами.

Научный консультант исследования – д.м.н., профессор Пивник А.В.

В Отделении химиотерапии гематологических заболеваний и интенсивной терапии ГНЦ РАМН был составлен экспериментальный протокол "Применение доксорубицина, связанного с эритроцитами, у больных с лимфопролиферативными заболеваниями" (1996 г.) и форма информированного согласия больного на проведение лечения по данному протоколу, утвержденная в этическом комитете ГНЦ РАМН.

В данное исследование были включены 17 больных с различными лимфопролиферативными заболеваниями 3 и 4 стадии. Отбор больных на проведение лечения по протоколу с применением эритроцитов-переносчиков проводился после констатации резистентности к проводимой стандартной химиотерапии, рецидива заболевания или плохой переносимости стандартной формы антрациклиновых антибиотиков. Пол - 10 мужчин и 7 женщин. Возраст пациентов колебался от 16 до 75 лет, медиана составила 50 лет. Химиотерапия проводилась по протоколам химиотерапии СНОР или ABVD, согласно которым доксорубицин вводится пациенту однократно за курс, в дозах 25 или 50 мг/м² на введение.

В качестве контроля у 7 больных из экспериментальной группы и 2 больных не из экспериментальной группы была исследована фармакокинетика доксорубицина при введении стандартной формы препарата в тех же дозах (табл. ).

Для приготовления препарата доксорубицина, связанного с эритроцитами, использовали:

- аутологичную цельную кровь пациентов (в этом случае препарат будет называться КПДО – кровь, прединкубированная с доксорубицином. Осуществлено 8 введений).

- аутологичные эритроциты, выделенные из крови удалением плазмы (АЭНДО – аутоэритроциты, нагруженные доксорубицином. Осуществлено 9 введений),

- консервированные донорские эритроциты (ДЭНДО – донорские эритроциты, нагруженные доксорубицином. Осуществлено 10 введений).

Для приготовления препарата КПДО использовалась специальная портативная установка, та же, что и для приготовления КПДА (рис. 3). Процедура приготовления КПДО была идентичной процедуре приготовления КПДА.

Для приготовления АЭНДО у пациента с помощью клинической установки для плазмафереза отбиралось около 400 - 500 мл крови, плазма этой крови возвращалась пациенту сразу, а в контейнер с эритроцитами вводилось 100 - 150 мл раствора доксорубицина в физиологическом растворе. Затем контейнер помещался на качалку и инкубировался в течение 1 часа при 37^оС.

Для приготовления ДЭНДО в контейнер с консервированными донорскими эритроцитами (после проверки их совместимости с плазмой пациента) вводилось 150 - 200 мл раствора доксорубицина в физиологическом растворе. Затем контейнер помещался на качалку и инкубировался в течение 1 часа при 37^оС.

После окончания инкубации приготовленный препарат доксорубицина, связанного с эритроцитами (КПДО, или АЭНДО, или ДЭНДО) вводился пациентам через центральный венозный либо переферический катетр в течение 1 – 1,5 часа по процедуре, идентичной введению ресуспендированной консервированной донорской эритроцитарной массы при заместительной гемокомпонентной терапии.

Для определения концентрации доксорубицина у пациента отбирались образцы крови. При введении стандартной формы доксорубицина первая проба отбиралась непосредственно после окончания введения, далее через 15, 30 минут, 1, 2, 6, 18, 24 часа после окончания введения. При введении доксорубицина, связанного с эритроцитами первая проба отбиралась непосредственно после окончания введения, далее через 15, 30 минут, 1, 2, 4, 6, 8, 18, 24, 48 часов после окончания введения, далее – регулярно, до снижения концентрации препарата в крови до нерегистрируемого уровня. Образцы крови и плазмы (полученные путем центрифугирования крови в течение 10 минут при 1000 g) хранились в замороженном виде при (–15^о ) – ( -20^оС).

После завершения отбора всех проб у данного больного, образцы крови и плазмы размораживались для определения концентрации доксорубицина. Доксорубицин из образцов крови и плазмы экстрагировался с помощью хлороформа. С этой целью к 1 мл образца добавлялось 10 мкл 1,6М К₂СО₃ и 3 мл хлороформа. Смесь интенсивно встряхивалась и центрифугировалась 3 мин при 1000 g. Хлороформный экстракт (нижний слой в центрифужной пробирке) аккуратно отбирался стекляным шприцом. Концентрация доксорубицина определялась спектрофлюорометрически по излучению на длине волны 588 нм при длине волны возбуждения 476 нм. Для калибровки использовались хлороформные экстракты растворов доксорубицина известной концентрации.