5. Фармакокинетика рубомицина после введения больным с острыми лейкозами рубомицина, связанного с аутоэритроцитами.

Исследования фармакокинетики рубомицина после введения больным рубомицина, связанного с аутоэритроцитами проведены совместно с Гармаевой Т.Ц., научный консультант – д.м.н., профессор Савченко В.Г. В отделении химиотерапии гемобластозов и трансплантации костного мозга ГНЦ РАМН был составлен экспериментальный протокол «Применение рубомицина, связанного с эритроцитами, у больных с резистентными формами и рецидивами острых лейкозо (I фаза )» (1997 г.) и форма информированного согласия больного на проведение лечения по данному протоколу, утвержденная в этическом комитете ГНЦ РАМН.

В данное исследование были включены 14 больных с острым лейкозом (ОЛ), из них 8 больных с острым миелоидным лейкозом (ОМЛ) и 6 больных с острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ). Отбор больных на проведение лечения по протоколу с применением эритроцитов-переносчиков проводился после констатации резистентности к проводимой стандартной химиотерапии или рецидива заболевания. Пол - 7 мужчин и 7 женщин. Возраст пациентов колебался от 15 до 60 лет, медиана составила 41 год.

Химиотерапия проводилась по протоколам лечения ОМЛ «7+3» (одной больной - по программе DidAC) и ОЛЛ “RACOP” [Wiernik 1992, Buchner 1992, 1992, Савченко 1997], согласно которым рубомицин вводится пациенту однократно в 1, 2, 3 дни курса в дозах 45 или 60 мг/м² на введение.

В данном исследовании 5 пациентам первые два введения рубомицина осуществлялись в виде стандартной формы препарата (раствор рубомицина), третье введение рубомицина осуществлялось в эритроцитной форме. Одному из пациентов такой курс проводили дважды. (Всего 6 введений).

9 больным все три введения рубомицина были проведены в эритроцитной форме. (Всего 27 введений).

Одной больной перед проведением курса с применением эритроцитов-переносчиков была удалена селезенка, у нее первые два введения рубомицина осуществлялись в виде стандартной формы препарата (раствор рубомицина), третье введение рубомицина осуществлялось в эритроцитной форме. (Всего 1 введение).

В качестве контроля у некоторых из этих больных была исследована фармакокинетика рубомицина при трехкратном введении стандартной формы препарата в тех же дозах.

Для приготовления эритроцитов, нагруженных рубомицином в клинических условиях была разработана специальная портативная установка (совмещающая в себе механическую качалку, полупроводниковый светоизолированный термостат для пластиковых контейнеров и полупроводниковый прибор для контроля температуры контейнера, а также весы для контроля количества взятой крови). Схема приготовления эритроцитов-переносчиков антрациклиновых антибиотиков в цельной крови больных и схема установки для инкубации эритроцитов с антрациклиновыми антибиотиками представлены на рис. 3. Полученный препарат эритроцитов-переносчиков рубомицина далее будет именоваться КПДА (кровь, прединкубированная с рубомицином (даунорубицином)).

Для приготовления КПДА у пациента отбиралось 300 – 400 мл крови из центрального венозного катетера в пластиковый контейнер «Гемакон» или Baxter. Во время отбора крови в контейнер осуществлялось термостатирование при 37^оС и перемешивание уже отобранной крови. Количество отобранной крови контролировалось взвешиванием.

После отбора необходимого количества крови, контейнер с кровью отсоединяли от катетера больного, катетер стандартным образом промывали и закрывали. Одновременно герметично перекрывался шланг контейнера с кровью, по которому поступала кровь в контейнер от больного. В процедурном кабинете в стерильных условиях в шланг контейнера с кровью шприцем вводилось 20 – 50 мл раствора рубомицина в физиологическом растворе, после чего шланг герметично перекрывался пережиманием корнцагом и перевязыванием. Затем контейнер помещался на качалку и инкубировался в течение 1 часа при 37^оС. После окончания инкубации приготовленный препарат КПДА вводился пациентам через центральный венозный катетр в течение 1 – 1,5 часа по процедуре, идентичной введению ресуспендированной консервированной донорской эритроцитарной массы при заместительной гемокомпонентной терапии.

Для контроля стерильности процедуры приготовления КПДА делался лабораторный бактериологический анализ проб крови из контейнера после отбора крови пациента и перед введением содержимого контейнера пациенту.

Для определения концентрации рубомицина у пациента отбирались образцы крови. При введении стандартной формы рубомицина первая проба отбиралась непосредственно после окончания введения, далее через 5, 15, 30 минут, 1, 2, 6, 18, 24 часа после окончания введения. При введении КПДА первая проба отбиралась через 30 минут после начала введения, а следующая проба – непосредственно после окончания введения, далее через 0.5, 1, 2, 6, 18, 24 часа после окончания введения КПДА. После введения КПДА в 3 день курса пробы регулярно отбирались в течение 5 – 7 дней раз в день до снижения концентрации препарата в крови до нерегистрируемого уровня. Образцы крови и плазмы (полученные путем центрифугирования крови в течение 10 минут при 1000 g ) хранились в замороженном виде при (–15^о ) – ( - 20^оС).

После завершения отбора всех проб у данного больного, образцы крови и плазмы размораживались для определения концентрации рубомицина. Концентрацию рубомицина определяли по методике, описанной выше в разделе «Методики определения антрациклиновых антибиотиков в биологических жидкостях».