Занятие 2. Общие и специфические цветные реакции на белки и свободные аминокислоты

№ п/п

УЭ

Учебный материал с указанием заданий

Рекомендации по выполнению заданий, оценка

УЭ-0

Цель занятия: продолжить изучение физико-химических свойств белков;

закрепить знание формул аминокислот;

развить навыки работы с химическим оборудованием и реактивами.

Внимательно прочитайте цель занятия. Запишите дату, номер и название занятия в тетради для СРС.

в СРС являются УЭ-1.

аСРС являются УЭ-2, 3, 4.

УЭ-1

Цель: закрепить знание формул аминокислот.

Задание 1.1. Повторите формулы аминокислот, классификацию аминокислот по строению радикала, по способности к синтезу в организме человека. Умейте соединить аминокислоты пептидной связью, охарактеризовать пептид. Подготовьтесь к самостоятельной работе на аудиторном занятии.

Письменно тренируйтесь в написании формул.

УЭ-2

Цель: продолжить изучение физико-химических свойств белков.

1.1. Выполните лабораторную работу № 2 «Обнаружение белков и аминокислот в биологических жидкостях. Цветные реакции на белки».

Цель: убедиться, что белки – это полипептиды, молекулы которых состоят из остатков аминокислот; выполнить общие и специфические реакции, с помощью которых можно обнаружить белки и аминокислоты в растворах.

Общие цветные реакции на белки

Оборудование и реактивы: штатив с пробирками, водяная баня, лакмусовая бумага, чашка Петри. Раствор белка, гидроксид натрия (10%-й раствор), сульфат меди (1%-й раствор), нингидрин (0,2%-й спиртовой раствор).

1. Биуретовая реакция – доказывает наличие пептидных связей в объекте исследования.

Ход работы:

В пробирку налейте 1 мл раствора яичного белка, добавьте 1–2 мл гидроксида натрия до щелочной среды (по лакмусовой бумаге) и 2–3 капли сульфата меди. При встряхивании появляется фиолетовое окрашивание.

При использовании растворов белка разного происхождения (животный или растительный белок) можно сравнить окраску продукта реакции. Это зависит от количества пептидных связей в молекуле изучаемого белка.

2. Нингидриновая реакция – доказывает наличие аминогрупп в объекте исследования.

Ход работы:

В пробирку налейте 1 мл раствора яичного белка, добавьте 10 капель нингидрина и нагрейте. Постепенно появляется фиолетовое окрашивание раствора, который со временем темнеет.

Специфические реакции на белки

Оборудование и реактивы: штатив с пробирками, водяная баня. Раствор белка, азотная кислота (концентрированная), гидроксид натрия (10%-й раствор), ацетат свинца (0,5%-й раствор), сахароза (10%-й раствор), серная кислота (концентрированная).

3. Ксантопротеиновая реакция (на циклические аминокислоты: тирозин, триптофан, фенилаланин).

Ход работы:

1. В пробирку налейте 1 мл раствора яичного белка, добавьте 5–6 капель концентрированной азотной кислоты. Появляется осадок, который при нагревании окрашивается в желтый цвет.

2. Пробирку охладите и добавьте 10%-й раствор гидроксида натрия, при этом желтая окраска переходит в оранжевую.

4. Реакция Фоля (на аминокислоты цистеин, цистин).

1. В пробирку налейте 1 мл 0,5%-го раствора ацетата свинца, прибавьте раствор яичного белка, добавьте 10%-й раствор гидроксида натрия до растворения образовавшегося осадка (реактив Фоля) и прилейте 1 мл раствора белка.

2. Смесь нагрейте. Постепенно проявляется бурое окрашивание, которое со временем темнеет.

5. Реакция Шульца-Райспайля (на аминокислоту триптофан).

В пробирку налейте 1 мл раствора яичного белка, 1 мл раствора сахарозы и осторожно, по стенке, добавьте 1 мл концентрированной серной кислоты. На границе раздела жидкостей со временем возникает красно-фиолетовое кольцо.

1.2. Запишите вывод.

1.3. Подготовьте ответы на вопросы:

1. Чем отличаются понятия «общие цветные реакции» и «специфические цветные реакции»?

2. Объясните принципы цветных реакций на белки и аминокислоты.

3. Как можно доказать наличие белков в исследуемых объектах?

1.4. Проведите определение белков в исследуемых объектах (молоко, кровь, мясо, творог и др.) выбранным способом.

6. Обнаружение белка в биологическом материале.

Ход работы:

В пробирку налейте исследуемый объект, разведите дистиллированной водой 1:2 и проведите биуретовую реакцию.

7. Обнаружение белка в слюне

Ход работы:

В пробирку соберите 0,5 мл слюны, разведите дистиллированной водой 1:2 и проведите биуретовую реакцию.

8. Открытие аминокислот в поте

Ход работы:

Кусочек фильтровальной бумаги размером 3х3 сожмите большим и указательным пальцами так, чтобы на ней остались отпечатки пальцев. Затем бумажку, поместив на чашку Петри, смочите раствором нингидрина и слегка нагрейте на водяной бане. Через несколько минут на месте отпечатков пальцев появится фиолетовое пятно.

Сделайте вывод.

1.5. Запишите вывод по лабораторной работе № 2.

Запишите цель работы, оборудование, реактивы.

Время работы 40 мин.

Проведите следующие реакции:

а) общие цветные реакции на белки: биуретовую и нингидриновую;

б) специфические цветные реакции на белки: ксантопротеиновая и реакция Фоля.

Проанализируйте, какими реакциями можно доказать наличие белка в изучаемом объекте. Проведите определение белков в изучаемых объектах.

Работайте с группой.

Самостоятельно.

Обсудите в группе.

Работайте с группой.

Самостоятельно в тетради для СРС.

УЭ-3

Цель: отчитаться по знанию формул аминокислот, умению составить трипептид и характеризовать его.

Примерные вопросы самостоятельной работы:

1. Написать формулы незаменимых аминокислот.

2. Составить трипептид, состоящий из аминокислот арг, фен, асп. Дать название. Определить суммарный заряд в разных средах, среду ИЭТ.

Самостоятельная работа по вариантам. Время 15 мин.

УЭ-4

4. Подведение итогов занятия.

1. Прочитайте цель занятия и самостоятельно оцените степень ее достижения: «отлично», «хорошо», «удовлетворительно». Отметьте самооценку в карте «Характеристика работы студента».

3. Домашнее задание. Если ваша самооценка «отлично», «хорошо», то готовьтесь к занятию 3 «Углеводы. Определение углеводов качественными реакциями». Если ваша самооценка «удовлетворительно» и ниже – проработайте занятие 2 еще раз.

Время 5 мин.

Работайте вместе с группой.