3.2. Источники света

Выбор источников света определяется спектром возбуждения флуорохрома и квантовым выходом. Для слабых флуорохромов с низкой Q требуется больше света, чем для сильных флуорохромов. Некоторые источники света [ртутные (Hg) лампы] характеризуются крутыми пиками испускания в диапазоне 300—700 нм. Для других ламп, например вольфрамовых и ксеноновых (Хе), характерны менее отчетливые пики в данной области. Галогеновые лампы демонстрируют увеличение ис­пускания по мере увеличения длины волны, а ксеноновые лампы имеют отчетливые пики в дальней красной и инфракрасной областях спектра (табл. 6.1).

Галогеновые лампы с вольфрамовой нитью (12 В, 50 и 100 Вт) представляют собой удобный и недорогой источник света при обычных исследованиях в тех случаях, когда препараты дают достаточно высокую интенсивность флуоресценции. Эти источники могут использоваться для освещения препара­тов как проходящим, так и падающим светом, их можно легко и часто включать и выключать, не опасаясь повредить лампу.

В спектре испускания ртутной лампы есть характерные ли­нии, например 366, 405, 436, 546 и 578 нм, и, кроме того, име- ется сильное свечение между линиями. В области синего света, например, свечение у ртутной лампы значительно ярче, чем у галогеновой. Ртутные лампы рекомендуется применять, если нужен УФ-свет или интенсивное возбуждение [14]. Выпускаются ртутные лампы мощностью 50, 100 и 200 Вт. Следует отметить, что лампа мощностью 100 Вт имеет меньшую дугу, чем лампы 50 и 200 Вт. Ртутные лампы имеют ограниченный срок эксплуатации (около 200 часов горения) и используются с источниками питания переменного тока, а 100-ваттные лампы могут использоваться с источниками постоянного тока (для измерений).

Для ксеноновых ламп характерен спектр испускания с относительно постоянной интенсивностью от УФ до красного света [13]. Поставляются лампы мощностью 75, 150 и 450 Вт с гарантированной продолжительностью эксплуатации соответствен­но 400, 1200 и 2000 часов горения. Обращаться с ксеноновыми лампами следует с осторожностью, так как даже холодные лампы находятся под давлением и поэтому при замене и уста­новке лампы надо пользоваться защитными очками. Эти лампы работают с источниками постоянного тока.

И ртутные, и ксеноновые лампы стоят дорого. Их следует поджигать в условиях, когда мало механических вибраций, например ночью, и использовать стабилизатор напряжения для компенсации больших колебаний напряжения в электрической сети. Это позволяет получить более стабильную точку поджига и значительно стабилизировать световой поток для измерений флуоресценции, которые следует производить с использованием источников постоянного тока.

Лазеры позволяют получить монохроматическое излучение очень большой интенсивности и могут, таким образом, служить источником света при флуоресцентной микроскопии в особых случаях [15, 16]. Использование их в обычных исследованиях лимитируется высокой стоимостью и сравнительно коротким периодом эксплуатации. Лазеры могут быть источниками не­прерывного или импульсного света; при использовании корот­ких импульсов возбуждения (от 1 мкс до 1 не) часто можно избежать выцветания флуоресценции. Лазеры применяются в сканирующей флуоресцентной микроскопии [17] — новом типе флуоресцентной микроскопии, который будет обсуждаться в разд. 6.