Иммунохимические методы анализа в клинической лаборатории

И.А.Новикова

Иммунохимические методы исследований

Иммунохимические методы исследований – методы, основанные на специфической реакции взаимодействия антигена с антителом.

Cфера применения – для определения концентрации химических веществ, содержащихся в очень низких концентрациях в биологическом материале.

Белки сыворотки крови: Иммуноглобулины, липопротеины

Опухолевые маркёры: Раково-эмбриональный антиген (РЭА), альфа-фетопротеин и др.

Гормоны

Инфекционные маркёры: Нbs Ag,Anti-HIV

Маркеры воспаления: Ревматоидный Фактор, С- Реактивный Белок

Лекарственные вещества: Теофиллин, Дигоксин, Фенитоин и др.

Аналитические характеристики иммунохимических методов

Специфичность: 95-98%, позволяют дифференцировать химические вещества, имеющие очень схожую молекулярную структуру (например, тироксин и трийодтиронин).

Чувствительность: до 10 - 23 моль/л.

Принцип иммунохимических методов исследования

Основа технологии любого иммунологического метода исследования –

реакция между антигеном и антителом.

Антиген - вещество, распознающееся иммунной системой

Антитела (иммуноглобулины) - белки,

специфически реагирующие с Аг.

Антиген подходит к определенному антителу как «ключ к замку».

Общая схема строения иммуноглобулинов

Методы иммунохимического тестированияAg + At = Комплекс AgAt.

1.Детекция антигена - тест-система должна иметь в своём составе соответствующее антитело (для определения концентрации дигоксина надо иметь в тест- системе антитела к нему)

2.Детекция антител - тест-система должна содержать в своём составе соответствующий антиген (для определении антител к НbSAg в тест системе должен содержаться синтетический HbSAg)

Антитела, применяемые

виммунохимических тест-системах

1.Моноклональные антитела - получают от одной клеточной линии (клона) применением гибридомных технологий. Они обладают одинаковой специфичностью и связывающей способностью.

2.Поликлональные антитела - смесь антител, полученных от различных клеточных линий. Получают из сыворотки иммунизированных животных. Антитела в такой смеси могут различаться по связывающей способности.

Условия получения оптимальных результатов иммунохимического тестирования

Измерение результатов

иммунохимической реакции

Зависит от характеристик антигена (размеры, количество, структура) и антител (авидность, специфичность).

прямая детекция (определение группы крови;

агглютинация бактерий, радиальная иммунодиффузия, иммуноэлектрофорез и др.)

непрямая детекция – используется, когда прямая

визуализация реакции невозможна (невидима). Но если лиганд связан с твердой фазой, то реакция становится видимой (латексная агглютинация, пассивная гемагглютинации)

детекция на основе меченого антигена или антитела

применяют для обнаружения и определения антител (или антигенов) в низких концентрациях.