Источники света при световой микроскопии

Используется естественный свет либо искусственное освещение (лампы накаливания, галогенные, ртутные).

Вотечественных старых световых микроскопах используется лампа накаливания РН8-20-1, а

в современных микроскопах отечественного и зарубежного производства - в основном галогеновые лампы, чаще всего фирмы «OSRAM» (Германия), с напряжением 6 В, мощностью 20 или 30 Вт. В исследовательских микроскопах применяют более мощные лампы — напряжением 12 В и мощностью 50 или 100 Вт.

Световые микроскопы

воспроизведение объекта в двухмерном пространстве

— двухмерное плоское изображение. Можно просматривать объекты толщиной от 10 до 0,1 мм, просматриваемый слой по высоте от 1,0 до 0,001 мм.

стереоскопические (объемное или трехмерное изображение объекта). Позволяют рассматривать прозрачные и полупрозрачные объекты, объекты большого размера (от 100 до 1 мм). Просматриваемый слой по высоте (глубине) — от 50 до 0,5 мм

Микроскопы проходящего света плоского поля называют в отечественной литературе биологическими микроскопами.

Инвертированные микроскопы

Инвертированные микроскопы

(перевернутое строение схемы микроскопа) - наблюдательная часть микроскопа

(бинокулярная насадка с окулярами) расположена снизу объекта. Оптическая система расположена ниже предметного столика, а источник света — выше. Это обеспечивает возможность свободных микроманипуляций с объектом наблюдения. Используется для работы с культурами клеток.

Типы микроскопии в зависимости от принципов построения изображения

Микроскопы светлого поля — на светлом фоне наблюдается более темное изображение объекта.

Микроскопы с методом темного поля - применяют освещение под таким углом, чтобы световые лучи от осветителя не попадали в объектив. Наблюдаемые объекты становятся при этом видимыми как светящиеся точки на темном поле или контур объекта имеет ярко блестящий вид.

Микроскопы с методом фазового контраста (фазово- контрастная микроскопия) позволяют с максимальной степенью визуализации и детальности наблюдать на сером фоне более темное «объемное» изображение объекта, окруженное по контуру светлой полосой.

Люминесцентные микроскопы

Обеспечивают возможность наблюдения на темном фоне свечения объектов под воздействием света.

Преимущества люминесцентной микроскопии:

обеспечивает цветное свечение и высокую степень контрастности светящихся объектов

возможность исследования как прозрачных, так и непрозрачных живых объектов

С помощью люминесцентных микроскопов проводят фенотипический анализ клеток периферической крови, костного мозга и тканей по наличию поверхностных антигенов с применением моноклональных антител.

Поляризационные микроскопы

Обеспечивают наблюдение на сером или темном фоне разноцветного, четкого или контрастного изображения. Обычный прямо проходящий свет с помощью полярофильтров поляризатора в осветительной системе превращается в имеющий одно преимущественное направление линейно-поляризованный свет.

Преимущества:

высокая степень контрастности и четкости изображения в поляризованных лучах;

визуализация объектов, невидимых в обычном свете и обладающих свойством анизотропии (двойного лучепреломления).

Анизотропные структуры (с упорядоченным расположением молекул - кристаллы, фибриллярные белки) становятся видимыми как ярко светящиеся на темном фоне.

Применяют при анализе состава почечных и желчных камней, гистологических срезов и др.

Лазерные микроскопы

Позволяют сканировать объект в трех измерениях и с помощью компьютера, сопоставляя до 20 срезов в разных позициях, формировать трехмерное изображение объекта, не давая, однако, точной цветопередачи. Предназначены для исследования объектов в трехмерном изображении на уровне разрешения, приближенного к электронной микроскопии с помощью лазерной системы, состоящей из 3 — 4 лазеров и комплексной системы светофильтров.

Преаналитический этап при микроскопии

Необходимо соблюдение техники приготовления мазка: тонкий, монослойный, без повреждения клеток, обеспечивающий раздельное расположение клеток

Автоматические устройства для приготовления равномерных мазков:

Центрифугирование. Цитоцентрифуга концентрирует клетки на небольшой площади, и такие мазки используют для изучения клеток в низких концентрациях, например в спинномозговой жидкости.

Механическое распределение клеток с помощью специальных устройств. Требуют применения стандартных стекол. Предусмотрено в современных гематологических анализаторах.

Фиксация мазков

Фиксация необходима для придания клеткам стойкости к воде, содержащейся в краске, а также для коагуляции белка, что обеспечивает прикрепление клеток к стеклу.

Наиболее широко используемые фиксаторы:метанол

этанол

10 % формалин и лиофилизация - для

фиксации срезов тканей,

глутаровый альдегид (0,5 % и 0,2 % растворы).

для препаратов, исследуемых под электронным микроскопом

Окраска мазков

Позволяет изучить морфологию клетки.

Основана на химическом сродстве основных частей клеток к определенным анилиновым краскам. Структуры, содержащие щелочные компоненты, воспринимают кислые компоненты красок и наоборот. Ядра в значительном количестве содержат нуклеиновую кислоту и окрашиваются главным образом основными красками.