Иммунохимические методы анализа в клинической лаборатории
И.А.Новикова
Иммунохимические методы исследований
Иммунохимические методы исследований – методы, основанные на специфической реакции взаимодействия антигена с антителом.
Cфера применения - показаны в ситуациях, когда необходимо количественно определить концентрации химических веществ, содержащихся в очень низких концентрациях в биологическом материале.
Белки сыворотки крови: Иммуноглобулины, липопротеины
Опухолевые маркёры: Раково-эмбриональный антиген (РЭА), альфа-фетопротеин и др.
Гормоны
Инфекционные маркёры: Нbs Ag,Anti-HIV
Маркеры воспаления: Ревматоидный Фактор, С- Реактивный Белок
Лекарственные вещества: Теофиллин, Дигоксин, Фенитоин и др.
Специфичность и чувствительность иммунохимических методов
Специфичность: иммунохимические методы высокоспецифичны (95-98%), можно легко и точно дифференцировать в биологической пробе химические вещества, имеющие очень схожую молекулярную структуру (например, Тироксин и Трийодтиронин).
Чувствительность: При помощи иммунологических методов исследования в биологической пробе можно определить химические вещества в концентрациях вплоть до 10 - 23 моль/л.
Принцип иммунологических методов исследования
Основа технологии любого иммунологического метода исследования –
реакция между антигеном и антителом.
Антиген - вещество, распознающееся иммунной системой
Антитела (иммуноглобулины) - белки,
специфически реагирующие с Аг.
Антиген подходит к определенному антителу как «ключ к замку».
Общая схема строения иммуноглобулинов
Схема взаимодействия антигена с комплементарным ему антителом
Перекрестное взаимодействие.
Связывание вещества, структура которого очень схожа со структурой антигена, с соответствующим антителом называется перекрёстной реакцией Связывающее сродство в перекрестных реакциях как правило более низкое чем в процессе реагирования между абсолютно специфичными партнёрами.
Методы иммунохимического тестирования
Ag + At = Комплекс AgAt.
1. Детекция антигена - тест-система должна иметь в своём составе соответствующее антитело (для определения концентрации дигоксина надо иметь в тест- системе антитела к нему)
2. Детекция антител - тест-система должна содержать в своём составе соответствующий антиген (для определении антител к НbSAg в тест системе должен содержаться синтетический HbSAg)
3. Детекция иммунного комплекса (т.е. связанных между собой Антигена и Антитела) – реакция преципитации, агглютинации и т.д. ( в зависимости от
молекулярной массы и концентрации в сыворотке крови исследуемого антигена
Антитела, применяемые
виммунохимических тест-системах
1.Моноклональные антитела - полученные от одной клеточной линии ( клона), синтезируются клетками гибридомы. Такие Ат при взаимодействии со специфическим антигеном обладают одинаковой специфичностью и связывающей способностью.
2.Поликлональные антитела - смесь антител, полученных от различных клеточных линий. Получают из сыворотки иммунизированных животных. Антитела в такой смеси могут различаться по связывающей способности.
Иммунохимические методы –
основные технологические подходы
Гомогенные иммунохимические методы
Не предусматривается использование «твёрдой фазы»
Отсутствуют процедуры разделения между несколькими реакционными стадиями
Выполняются относительно быстро.