
- •Ферменты и изоферменты
- •Ферменты
- •Коферменты
- •Свойства ферментов
- •Основные классы ферментов
- •ИЗОФЕРМЕНТЫ
- •ЛОКАЛИЗАЦИЯ ФЕРМЕНТОВ В КЛЕТКЕ
- •ЛОКАЛИЗАЦИЯ ФЕРМЕНТОВ В КЛЕТКЕ (продолжение)
- •РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ФЕРМЕНТОВ СРЕДИ ОРГАНОВ И ТКАНЕЙ
- •Активность ферментов в некоторых тканях человека
- •МЕХАНИЗМЫ ГИПЕРФЕРМЕНТЕМИИ ПРИ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЯХ
- •Факторы, влияющие на скорость высвобождения ферментов из тканей
- •Механизмы инактивации и удаления энзимов
- •Период "полужизни" некоторых ферментов в плазме крови
- •ОБЩИЕ ПРАВИЛА ОПРЕДЕЛЕНИЯ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТОВ
- •Основные условия при определении активности ферментов
- •Методы определения активности ферментов
- •Требования к материалу при определении ферментов
- •Требования к материалу при определении ферментов (продолжение)
- •Выражение результатов определения активности ферментов
- •ЛАКТАТДЕГИДРОГЕНАЗА
- •Клиническое значение определения активности ЛДГ сыворотки крови
- •Изоферменты ЛДГ и их диагностическое значение
- •Диагностическое значение изоферментов ЛДГ
- •Аминотрансферазы (трансаминазы) сыворотки.
- •Диагностическое значение определения АсАТ и АлАТ в сыворотке
- •α- амилаза сыворотки и мочи
- •Клиническое значение определения α- амилазы
- •Креатинфосфокиназа сыворотки (КФК)
- •Клиническое значение определения КФК и изоферментов
- •Клиническое значение определения КФК и изоферментов
- •Гамма-глутамилтранспептидаза сыворотки
- •Основные процессы, повышающие активность ГГТ в сыворотке
- •Клиническое применение определения ГГТ в сыворотке
- •Липаза сыворотки
- •Кислая фосфатаза сыворотки
- •Клинико-диагностическое значение определения КФ
- •Щелочная фосфатаза сыворотки
- •Клинико-диагностическое значение определения ЩФ
- •Холинэстераза
- •Клинико-диагностическое значение
- •Глутаматдегидрогеназа
- •Сорбитолдегидрогеназа (идитолдегидрогеназа)
- •Энзимодиагностика заболеваний печени
- •Энзимодиагностика при заболеваниях поджелудочной железы
- •Энзимодиагностика острого инфаркта миокарда
- •Энзимодиагностика болезней мышц и костей
- •Наследственные энзимопатии
- •Недостаточность глюкозо-6-фосфатазы
- •Клинические последствия и диагностика дефицита глюкозо-6-фосфатазы
- •Галактоземия
- •Фенилкетонурия
- •Клинические проявления и диагностика фенилкетонурии
- •Муковисцидоз
- •Лабораторная диагностика муковисцидоза
- •Наследственные дефекты лизосомных ферментов
- •Ферменты как опухолевые маркеры
- •Ферменты как опухолевые маркеры
- •БЛАГОДАРЮ ЗА ВНИМАНИЕ !!!

ЛАКТАТДЕГИДРОГЕНАЗА
ЛДГ— гликолитический фермент, обратимо катализирующий окисление лактата в пировиноградную кислоту.
L-лактат + НАД ↔ пируват + НАДФ + Н+
Активность в тканях: практически во всех органах, нааибольшая активность в почках, сердечной мышце, скелетной мускулатуре и печени. Много в эритроцитах.
Требования к материалу: полное отсутствие гемолиза (ЛДГ в эритроцитах ↑ в 100 раз, чем в сыворотке).
Определяют спектрофотометрическими и колориметрическими методами.
Норма в сыворотке – до 195 МЕ (при 250С).

Клиническое значение определения активности ЛДГ сыворотки крови
Инфаркт миокарда. ↑ЛДГ спустя несколько часов после ИМ , max через 36_48 ч (в 10—15 раз по сравнению с нормой). У больных стенокардией не повышается. Диагностическая точность при трансмуральном инфаркте 97±1,7% .
Заболевания печени. ↑ЛДГ в сыворотке при поврежедении целостности гепатоцитов- паренхиматозная желтуха. При механической желтухе в начале заболевания активность ЛДГ в норме, а на более поздних стадиях ↑ ЛДГ.
Прогрессирующая мышечная дистрофия ↑ЛДГ
Активность ЛДГ возрастает также при хронических лимфогранулематозах, лейкозах, пернициозной анемии и
других заболеваниях

Изоферменты ЛДГ и их диагностическое значение
Активность изоферментов ЛДГ в сыворотке крови в порядке убывания: ЛДГ2 > ЛДГ1 > ЛДГ3 > ЛДГ4 > ЛДГ5.
Изоферменты ЛДГ в лейкоцитах в норме: ЛДГ3 > ЛДГ2, > ЛДГ4 > ЛДГ1 > ЛДГ5.
Инфаркт миокарда: ↑↑↑ ЛДГ1, ↑ ЛДГ2. ЛДГ1/ЛДГ2 > 1. Изменения в
активности изоферментов сохраняются дольше, чем суммарной активности фермента. При неясной клинической картине и нормальной общей активности ЛДГ повышение активности ЛДГ1 указывает на мелкие некротические очаги в миокарде, не
регистрируемые другими способами.
Паренхиматозная желтуха: ↑↑↑ ЛДГ5 и ЛДГ4, ↓ЛДГ1 и ЛДГ2.
Мышечные дистрофии: в мышечной ткани ↓↓ЛДГ4 и ЛДГ5 (степень снижения коррелирует с тяжестью заболевания), ↑↑ ЛДГ1, ЛДГ2, и ЛДГ3. В сыворотке крови ↑↑ ЛДГ1, ЛДГ2 и ЛДГ3.

Диагностическое значение изоферментов ЛДГ
Острый лейкоз: ↑↑↑ ЛДГ2, ↑ЛДГ3 . Прямо пропорциональная зависимость между увеличением ЛДГ2 и количеством незрелых клеток.
Опухолевые заболевания: ↑↑ ЛДГ3 ЛДГ4 и ЛДГ5 в опухолевой (приближение к эмбриональному типу). Различия между злокачественными и доброкачественными максимальны по ЛДГ5. Степень изменения спектра изоферментов коррелирует с ростом опухоли.
Заболевания легких: ↑↑ ЛДГ3 при пневмониях. При выраженной гипоксии ↑ЛДГ4 и ЛДГ5 (активация гликолиза в связи с перестройкой метаболизма на анаэробный тип).

Аминотрансферазы (трансаминазы) сыворотки.
АсАТ и АлАТ осуществляют межмолекулярный перенос аминогрупп между аминокислотами и кетокислотами. Отличаются по названиям аминокислоты, от которой отщепляется аминогруппа.
Содержание АсАТ в тканях (по убывающей) – сердечная мышца, печень, скелетная мускулатура, головной мозг, почки, семенники. Активность в сердечной мышце в 10000 раз выше, чем в сыворотке. В эритроцитах – в 10 раз больше, чем в сыворотке. Поэтому сыворотка не должна содержать даже следов гемолиза.
Содержание АлАТ в тканях (по убывающей)– печень, поджелудочная, сердце, скелетная мускулатура.
Методы определения: спектрофотометрические, колориметрические, хроматографические.
Норма в сыворотке: АсАТ — 10-30 МЕ/л при 30˚С; АлАТ — 7-40 МЕ/л при 30˚С.

Диагностическое значение определения АсАТ и АлАТ в сыворотке
Инфаркт миокарда ↑↑↑ АсАТ (в 2-20 раз), ↑↑ АлАТ в 98% случаев. Ч/з 6-12 час., максимум – 24-48 часов, нормализация ч/з 4-5 дней. Степень повышения коррелирует с прогнозом. При стенокардии– в норме.
Заболевания печени: ↑↑↑ АлАТ, ↑ АсАТ при поражении гепатоцитов. Максимум на 6-10 день, нормализуется на 15-20 день. ↑↑↑ АлАТ отмечается рано (уже в инкубационом периоде) и даже при безжелтушных формах.
Снижение АсАТ и АлАТ - при недостаточности пиридоксина (витамина В6), процедуры гемодиализа; ХПН, Беременность.
Коэффициент де Ритиса: АсАТ / АлАТ = 1,33.
Коэффициент Шмидта: для дифференциальной диагностики заболеваний печени - АсАТ + АлАТ /ГлДГ (глютамат дегидрогеназа). При паренхиматозном гепатите ГлДГ меняется незначительно, а при механических желтухах – ↑↑↑ ГлДГ, но АсАТ + АлАТ ↑.

α- амилаза сыворотки и мочи
Гидролазы, катализирующие гидролиз полисахаридов. В плазме амилаза двух изоэнзимных типов - панкреатическая – Р-тип (составляет 40%) и слюнная – S-тип (60%). С мочой выделяется в основном Р- тип.
Норма в сыворотке 16-30 г/чхл, в моче – до 160 г/чхл.

Клиническое значение определения α- амилазы
Диагностика заболеваний поджелудочной железы (особенно уроамилаза в суточной моче). При о. панкреатите амилаза крови
имочи ↑↑↑ через 4-6 часов от начала заболевания, максимум 12- 24 часа (в 10-30 раз), затем быстро снижается и приходит к норме на 2-6 день. Диагностическая чувствительность амилазы сыворотки для острого панкреатита – 95%, специфичность – 88%. Уровень повышения сывороточной амилазы не коррелирует с тяжестью панкреатита.
Дополнительный диагностический признак при о. почечной недостаточности с олигурией, прободной язве, диабетическом кетоацидозе (↑ в 5-10 раз); ХПН, паротит - ↑ менее чем в 5 раз
Снижение показателя имеет место при остром и хроническом гепатите, недостаточности поджелудочной железы, иногда при токсикозе беременности.

Креатинфосфокиназа сыворотки (КФК)
Катализирует обратимую реакцию переноса фосфорильного остатка с АТФ на креатин и с креатинфосфата на АДФ.
Норма в сыворотке — 195МЕ/л при 30°С.
Требования к материалу: фермент нестабилен, содержимое эритроцитов ингибирует активность фермента, сыворотка должна быть быстро отделена от сгустка. Если исследование не может быть произведено немедленно, сыворотку необходимо заморозить.
Методы определения: колори- и спектрофотометрические.

Клиническое значение определения КФК и изоферментов
КФК- ММ – содержится в скелетных мышцах (в норме в сыворотке он составляет 97 — 100%). ↑↑↑ при повреждении скелетных мышц, мышцы сердца, мозга?; при заболеваниях мышц (дистрофия, гипотиреоз, дерматомиозит, полимиозит); при рабдомиолизе, после тяжелой физической нагрузки.
КФК - MB - характерен для миокарда(в сыворотке 0— 3%). ↑↑↑ в течение 2-4 час после ИМ, сохраняется до 72 ч (если больше – распространение ИМ) Увеличивается при тяжелом поражении мышц.
КФК - ВВ – характерен для мозга (в норме в сыворотке отсутствует). Появляется при тяжелом шоке, при некоторых карциномах, атрезии желчных протоков