Применение электрофореза в клинике
Основные клинические ситуации, в которых рекомендуется электрофорез белков сыворотки:
Абсолютное показание, необходимое для установления диагноза (никакая другая процедура не обеспечит получение эквивалентной информации также быстро и доступно) –
парапротеинемии, гемоглобинопатии, агаммаглоблинемии.
Клинически полезное в сочетании с другими исследованиями
– заболевания печени, нефротический синдром, злокачественные заболевания, коллагенозы.
Наблюдение и лечение заболевания, при которых происходят существенные нарушения в составе белков плазмы (необходимо использовать постоянно одну и ту же методику).
Скрининг. При популяционных обследованиях на выявление аномальных белков или дефицита отдельных белков плазмы.
N.B! Метод должен обеспечить разделение пяти основных фракций: альбумина, α1-, α2-, β- и γ-глобулина, а также небольшой зоны преальбумина.
Анализ электрофореграмм:
Для выявления разделенных белков применяют разнообразные методы.
Прямое исследование методами ультрафиолетовой и инфракрасной спектроскопии (денситометрия)
Осаждение неспецифическим агентом с
последующим окрашиванием образца
Специфические реакции фермент-субстрат,
приводящие к образованию окрашенного нерастворимого продукта.
Осаждение макромолекул при помощи
специфических антител. Образующийся нерастворимый преципитат исследуется либо прямым способом либо последующим окрашиванием красителем (иммуноэлектрофорез).
Иммуноэлектрофорез
Это двухэтапная процедура, при помощи которой макромолекулы (обычно белки) вначале разделяются с помощью электрофореза, а затем последовательно взаимодействуют с соответствующей антисывороткой, присутствующей в среде-носителе.
Классический вариант – на 1 этапе производят разделение белков в забуференном агаровом или агарозном геле, а затем латерально, параллельно разделенным компонентам прорезают щели, которые заполняют антисывороткой. Выдерживают в течение некоторого времени для диффузии компонентов (обычно ночь). Взаимодействие антиген- антитело обнаруживается по дугам преципитации. Метод позволяет выявить антигенный состав сложной смеси белков и идентифицировать отдельные компоненты смеси
с помощью моноспецифических антисывороток.
Вклинике используется для типирования парапротеинов
сыворотки и выявления белков Бенс-Джонса.
Схема иммуноэлектрофореза
Ракетный электрофорез
(электроиммунодиффузия)
Используют гель, содержащий АТ (как в иммунодиффузии). Вдоль кромки слоя геля 
делают ряд лунок, в которые помещают исследуемый материал. Затем проводят ЭФ → в
слое геля создается электрическое поле → АГ входят в гель. Они обычно движутся быстрее чем АТ и в одном направлении. Высота «ракеты», образующейся в ходе реакции прямо пропорциональна концентрации АГ, она измеряется от верхней границы лунки до высоты
пика. Метод удобен, надежен и прост.
Используется для определения альфа- фетопротеина в амниотической жидкости.
Схема ракетного электрофореза
Встречный электрофорез
ВИЭФ предназначен для обнаружения и индентификации преципитирующих систем АГ-АТ 
при условии, что АГ обладает электрофоретической подвижностью, отличной от той, которой обладают
иммуноглобулины.
АГ и АТ движутся навстречу друг другу в слое геля, в месте встречи – накопление преципитата.
Результат через 1-3 часа, чувствительность высокая.
Встречный электрофорез
Капиллярный электрофорез
Используют заполненные электролитом (буфером) кварцевые капилляры с внутренним диаметром 25-200 мкм и длиной 10- 100 см. К концам капилляров подается высокое напряжение – 10 000 – 30 000 в. Под действием напряжения возле стенок капилляра возникает отрицательное поле, в середине – положительное (за счет того, что кварц обладает положительно заряженными группами и под действием
напряжения там происходит поляризация электролита). Под влиянием электростатического поля в капилляре создается электроосмотический поток, направленный к катоду. С ним к катоду перемещаются компоненты смеси различных веществ с различной скоростью → разделение → детекция (фотометр, флуориметр, рефрактометр и т.д._ Преимущества: очень высокая эффективность разделения (белков, пептидов, витаминов, лекарственных препаратов), не требует 
прецизионных устройств.
