Белки плазмы крови

Заведующая кафедрой

Клинической лабораторной диагностики, д.м.н., доцент

Новикова И.А.

Белки

Это органические высокомолекулярные азотосодержащие вещества. В плазме крови известно около 200 различных белков. Суммарное количество белков плазмы составляет такое понятие как “общий белок” -

Норма - 65-85 г/л - нормопротеинемия.

Основные белки плазмы крови: альбумин

45-55 г/л, глобулины - 20-30 г/л, фибриноген - 2-4 г/л.

Место синтеза – печень, РЭС.

Физиологическая роль белков плазмы

Поддерживают коллоидно-онкотическое давление, сохраняя объем крови, связывая воду и задерживая ее, не позволяя выходить из кровеносного русла;

Принимают участие в процессах свертывания крови;

Поддерживают постоянство рН крови, являясь одной из буферных систем крови;

Соединяясь с рядом веществ (холестерин, билирубин и др.), а также с лекарственными препаратами, доставляют эти вещества к тканям;

Поддерживают нормальный уровень катионов — кальция, железа, меди, магния в крови, образуя с ними недиализируемые соединения;

Играют важнейшую роль в иммунных процессах;

Служат резервом аминокислот;

Входят в состав гормонов, ферментов и других биологически активных веществ.

Основные причины гиперпротеинемии

• Абсолютная:

незначительная - при инфекционном или токсическом

раздражении РЭС, в клетках которой синтезируется глобулин, например, хронический полиартрит или другие хронические воспалительные процессы;

стойкая до 120 г/л - встречается при миеломной

болезни, макроглобулинемии Вальденстрема (когда появляются дополнительные очаги образование патологических белков - парапротеинов);

• Относительная - при сгущении крови из-за

значительных потерь жидкости (поносы, рвота, усиленное потоотделение, несахарный диабет, холера, перитонит, тяжелые ожоги).

Причины развития гипопротеинемии

•Относительная - при гидратации (водной нагрузке);

•Абсолютная:

•при недостаточном поступлении белка с пищей

(голодание, нарушение функции ЖКТ)

•при уменьшении процесса биосинтеза белка (хронические гепатиты; метастазы в печень)

•за счет потери белка (кровотечения; образование обширных экссудатов, ожоги, потеря белка с почками при нефротическом синдроме);

•за счет усиленного распада белка (злокачественные опухоли; тяжелые инфекции; сепсис; лихорадка; тиреотоксикоз).

Парапротеинемия

Парапротеинемия – появление в плазме структурно-

аномальных, функционально-инертных белков. Выявляются при плазмоцитоме (миеломе), макроглобулинемии Вальденстрема, лимфопролиферативных заболеваниях, некоторых эпителиальных опухолях.

Дефектопротеинемия - отсутствует какой-либо белок или

целая фракция плазмы крови.анальбуминемия;афибриногенемия;ацерулоплазминемия.

Диспротеинемия - нарушение соотношения между

белковыми фракциями.

Способы определения общего белка

Азотометрические (метод Кьельдаля) – полное

разрушение белка серной кислотой→ определение содержания аммиака. Недостатки – трудоемкость, низкая точность.

Гравиметрические (весовые) – осаждение белков,

высушивание, взвешивание. Трудоемкость, низкая точность.

Флуориметрические – включение в структуру

белка или полипептида флуорогенной метки (флуоресцамин) →измерение интенсивности флуоресценции при возбуждении светом. Высокая чувствительность (до 1 мг/л).

Способы определения общего белка

Спектрофотометрические: Фотометрия в ультрафиолетовом диапазоне

(λ =280нм). Обусловлено присутствием аминокислот тирозина, трипотофана,

фенилаланина. Интерференция – нуклеиновые кислоты (адсорбируют на 280нм), рН (надо щелочную),мутность раствора.

Колориметрические:

Биуретовая реакция – в щелочной среде ионы меди образуют с белками (и пептидами) комплексы фиолетового цвета, измерение 500-560 нм. Хорошо воспроизводим, специфичен, доступен. Унифицирован. Чувствительность до 300 мг/л. Контрольный материал – плацентарный альбумин. Интерференция – высокая

концентрация билирубина, триглицериды, избыток CO2. Большинство лекарств интерференцию не вызывают.

Биуретовый метод Лоури – биуретовая реакция + реакция Фолина (восстановление комплекса молибдат-вольфрамат-фосфорная кислота) тирозином

итриптофаном белка. Чувствительность ↑ в 100 раз. Недостаток – невысокая специфичность. Интерференция – мочевая кислота, аминокислоты, ксантин, фенолы, углеводы, салицилаты, антибиотики, продукты ПОЛ, вещества, входящие в буферы). Применение – научные исследования.

•Методы, основанные на неспецифическом связывании белков с красителями: амидо черный, бромкрезоловый зеленый, тимоловый синий, бромсульфалеин, Кумасси бриллиантовый синий и др.). С Кумасси – не выявляет олигопептиды и свободные аминокислоты.

Альбумин в плазме крови

Синтез - в печени (примерно 15 г/сут), время полураспада в плазме составляет около 17 сут.

Функции альбумина:

Создает коллоидно-осмотическое (онкотическое) давление плазмы (65—80 %).

Резерв белка

Связывание и перенос эндо- и экзогенных веществ: билирубин, гормоны, жирные кислоты,

ионы кальция, хлора, лекарственные вещества.

Методы определения уровня альбумина

всыворотке крови

Высаливание глобулинов (сульфат натрия, сульфат

аммония, этанольный раствор ТХУ)→определение альбумина в н/ж

Электрофоретическое фракционированиеХроматографическое разделение, гельфильтрацияИммунохимическое определение

Прямое колориметрическое определение – сыворотка

+бромкрезоловый зеленый РН 4,2 – зелено-голубое окрашивание → фотометрия λ 580-630 нм. Высокая специфичность и чувствительность.

Флуориметрическое определение