Лекция Исследование семенной жидкости
Слайд Показания к исследованию семенной жидкости
Основное показание – диагностика бесплодия (до 40% бесплодных браков зависят от мужчин). Исследование предшествует обследованию женщины. Если при однократном исследовании патологии не выявляют – анализ необходимо повторить.
Сперма (эякулят) состоит из сперматозоидов, взвешенных в жидкой фазе.
Состав эякулята:
-
5% - сперматозоиды
-
60% - содержимое семенных пузырьков
-
20% - секрет простаты
-
15% - секреты придатков яичек, семявыносящих протоков, уретральных желез
Слайд Получение эякулята
Сбор спермы – оптимально в лаборатории при мастурбации, допустимо самостоятельно (срок доставки не позднее 2-х часов, не подвергая большим колебаниям температуры). Перед сбором спермы необходимо 3-дневное половое воздержание (более длительное не рекомендуется).
Слайд Схема исследования эякулята
-
Макроскопическое исследование
-
Определение количества сперматозоидов и их подвижности
-
Оценка морфологии сперматозоидов
-
Оценка биохимических показателей спермы
Слайд Макроскопическое исследование эякулята
Осмотр – вязкая непрозрачная жидкость (или сгусток)беловатого цвета.
Объем эякулята в норме - 3-5 мл.
Увеличение - полиспермия наблюдается редко, не говорит о полноценности эякулята.
Уменьшение – олигоспермия – встречается чаще. Количество сперматоизоидов может быть нормальным. Имеет следствием нарушение продвижения сперматозоидов к цервикальному каналу (недостаточно для нейтрализации кислой РН влагалища). Наблюдается у пожилых (снижение функции предстательной железы и семенных пузырьков). Объем менее 1 мл - атрофия яичек или андрогенная недостаточность. Свертывание: Норма – свертывается, через 20-30 минут разжижается (действие фибриназ секретов простаты). Если через 40 минут эякулят не разжижается - поражение простаты и семенных пузырьков.
РН нормального свежего эякулята - 7,2-7,6, при стоянии защелачивается. При РН 6,0 и менее наблюдается некроспермия.
Слайд Определение количества сперматозоидов
Количество сперматозоидов определяют в счетной камере после разбавления семенной жидкости специальным раствором (двууглекислый натрий — 5 г; формалин нейтральный — 1 мл; дистиллированная вода — до 100 мл). Подсчет по расположению головок.
Норма: 60 до 150 млн/мл (150-600 млн/эякулят) - нормозооспермия.
Олигозооспермия – концентрация сперматозоидов ниже 20 млн/мл
Слайд Оценка подвижности сперматозоидов в счетной камере
Производится по подсчету процента неподвижных клеток в счетных камерах после разбавления спермы в 20 раз теплым хлоридом натрия. Расчет по формуле – написать. Результат выражают в процентах.
Норма – не более 10-20% неподвижных.
Увеличение количества мертвых сперматозоидов – некроспермия.
Слайд Оценка характера подвижности сперматозоидов
Кинезисграмма – процентное соотношение сперматозоидов с различной подвижностью.
Каплю спермы поместить на предметное стекло, накрыть покровным, микроскопировать не менее 200 сперматозоидов в нескольких полях. Оценка визуально в баллах.
Подвижность сперматозоидов в норме сохраняется 24 часа при комнатной температуре. 3 вида подвижности:
• активно подвижные сперматозоиды – быстрое целесообразное поступательное движение с перемещением
• сперматозоиды подвижны, но не обладают способностью к поступательному перемещению (маятникообразные движения)
• сперматозоиды неподвижны все.
Сперма считается патологической, если меньше 60% сперматозоидов имеют поступательное движение в пробах, исследованных не позднее 2 ч от момента сбора.
Снижение активно подвижных сперматозоидов - астеноспермия.
Слайд Определение мертвых и живых сперматозоидов по Блуму
Принцип: эозин (смесь эозина с нигрозином) проходят через мембрану мертвых клеток, окрашивая их, живые не окрашиваются.
Приготовление препарата: капля спермы+краситель→ мазок, высушивание, окаршивание, микроскопия (иммерсия). Подсчет не менее 200 клеток. Мертвые – краснофиолетовые, живые – бесцветные.
Норма: 90-95% живых клеток.
Слайд Оценка морфологии сперматозоидов
Оценка формы и строения сперматозоидов.
Приготовление препарата: каплю свежей спермы нанести на предметное стекло, высушить, фиксировать (этанол+эфир), окрасить по Романовскому, микроскопировать. Подсчет не менее 200 клеток.
Норма: аномальных форм (микроголовка, макроголовка, расщепление головки, нет акросомы, аномалии шейки и т.д.) не более 15%.
Тератоспермия – увеличение аномальных форм сперматозоидов.
Слайд Клетки сперматогенеза в эякуляте
Обнаруживаются при микроскопии окрашенных мазков.
Норма: 0,5-2%, чаще всего сперматиды, сперматоциты.
Увеличение – при форсированном сперматогенезе.
Азоспермия – нарушение созревания сперматозоидов – увеличивается содержание молодых форм при отсутствии зрелых.
Аспермия – не обнаруживаются ни клетки сперматогенеза, ни сперматозоиды (атрофия гонад, закупорка семявыносящих протоков).
Слайд Другие клеточные элементы в эякуляте
Лейкоциты – в норме до 5-6 в поле зрения. Если больше - пиоспермия, сопровождает ряд воспалительных процессов мужских половых органов.
Эритроциты - в норме нет, могут появляться при воспалительных процессах, варикозном расширении вен, при опухолях, камнях.
Слайд Биохимические показатели спермы - фруктоза
Фруктоза – основной углевод, содержащийся в сперме. Определяют колориметрическим методом.
Норма – не менее 1,3 мкмоль/эякулят.
Клиническое значение – уменьшение уровня фруктозы в сперме наблюдается при недостаточности тестостерона, нарушениях функции семенных пузырьков.
Слайд Биохимические показатели спермы – лимонная кислота
Служит показателем функционального состояния предстательной железы, при простатитах значительно снижается.
Определение: эякулят центрифугируют для получения плазмы, осаждают белки (ТХУ), определяют содержание лимонной кислоты с помощью тест-системы.
Норма: более 52 мкмоль (10 мг)/эякулят.
Слайд Биохимические показатели спермы – цинк
Является показателем секреторной способности предстательной железы.
Определение: эякулят центрифугируют для получения плазмы, разводят дистиллированной водой, определяют содержание цинка с помощью тест-системы (подготовленные пробы можно сохранять замороженными).
Норма: более 2,4 мкмоль /эякулят
Слайд Тесты для выявления антиспермальных антител
АТ в семенной плазме чаще IgA и IgG.
Смешанный антиглобулиновый тест
На предметное стекло наносят 3 капли:
-
1 кп свежей спермы;
-
1 кп латексных частичек с покрытием IgG
-
1 кп антисыворотки к человеческому IgG.
Смесь накрывают покровным стеклом, микроскопируют (400х ).
Высчитывают процент сперматозоидов, к которым прикреплены латексные части цы, покрытые IgG.
Слайд Схема смешанного антиглобулинового теста
Рисунок
Слайд Нормальные значения показателей спермы
|
Показатель |
Нормальные значения |
|
Объем |
2 мл и более |
|
рН |
7,2-7,8 |
|
Концентрация сперматозоидов |
Более 20 млн/мл |
|
Общее кол-во сперматозоидов в эякуляте |
Более 40 млн |
|
Подвижность |
50% и более с поступательным движением или 25% и более с быстрым поступательным движением, в течение часа после сбора проб |
|
Морфология |
50% и более с нормальной морфологией |
|
Жизнеспособность |
50% и более живых |
|
Лейкоциты |
менее 1 млн/мл |
|
Цинк (общий) |
2,4 мкмоль и более на каждый эякулят |
|
Лимонная кислота (общая) |
52 мкмоль (10 мг) и более на каждый эякулят |
|
Фруктоза (общая) |
13 мкмоль и более на каждый эякулят |
|
Тест-РСА |
менее 10% с прилипшими к ним частичками |
Слайд
Номенклатура вариантов показателей спермы
Название |
Вариант показателей спермы |
|
Нормозооспермия |
нормальный эякулят |
|
Олигозооспермия |
концентрация сперматозоидов ниже 20 млн/мл |
|
Астенозооспермия |
менее 50% сперматозоидов с поступательным движением или менее 25% с более быстрым линейным поступательным движением |
|
Тератозооспермия |
менее 50% сперматозоидов с нормальной морфологией |
|
Олигоастенотератозооспермия |
наличие нарушений всех трех показателей |
|
Азооспермия |
сперматозоиды в эякуляте отсутствуют |
|
Аспермия |
нет эякулята |