Лекции / Оптические методы количественного анализа

эмиссионная фотометрия:

• флуориметрия

• пламенная фотометрия

• атомно-эмиссионный спектральный анализ

Слайд 4 Адсорбционная фотометрия (из лекции)

+схема на обороте

Слайд 5 Закон Бугера-Ламберта-Беера

С. 32 – Камышников

Слайд 6 Оптическая плотность раствора

Оптическая плотность раствора = экстинция = адсорбция раствора (Е, D, А) – логарифм отношения интенсивности падающего на раствор света (Io) к интенсивности света, прошедшего через раствор (It).

Формула =- стр 33Кам

Оптическая плотность растворов при прочих равных условиях прямо пропорциональна концентрации вещества!

Слайд 7 Светопроницаемость раствора

Светопроницаемость (прозрачность) раствора (Т) – отношение интенсивности монохроматического потока излучения, прошедшего через исследуемый объект, к интенсивности первоначального светового потока. Выражается в %.

Формула

Слайд 8 Спектрофотометрия

Измерение интенсивности …

Слайд 9 Нефелометрия

Лекция – абзац

Слайд 10 Основные методы нефелометрии

1) Собственно нефелометрия – рис

Измеряется интенсивность светового потока, возникшего вследствие рассеяния падающего на взвесь света. Оптимальное условие – использование растворов низкой концентрации.

Слайд 11 Основные методы нефелометрии (продолжение)

2)Турбидиметрия

Рис

Измеряется ослабление светового потока, прошедшего через мутный раствор. Все нефелометрические методы в клинике относятся к турбидиметрии – тимоловая проба, определение серомукоидов, беталипопротеидов, тесты агрегации тромбоцитов и др.

Слайд 11 а Наиболее частые длины волн, используемые для фотометрии

-лек

Слайд 12 Эмиссионная фотометрия

См. лек

Слайд 13 Флуориметрия

См лек

Слайд 14 Пламенная фотометрия

Слайд 15 Атомно-эмиссионный спектральный анализ

Схема

Преимущества метода: быстрота выполнения (3-4 часа, непосредственное измерение – около 5 мин), полная автоматизация, возможность анализа до 50 элементов.

Недостаток – высокая стоимость.

Слайд 16 Основные условия измерения при работе с фотометрической аппаратурой

Лек

Слайд 17 Основные условия измерения при работе с фотометрической аппаратурой (продолжение)

Лек

Слайд 18 Способы расчета результатов фотометрии

1. условные единицы

2. по стандартным (эталонным) растворам

3. по калибровочному графику

4. с помощью коэффициента пересчета

Слайд 19 Способ расчета результатов фотометрии по условным единицам

Условные единицы (у.е.) – лек

Слайд 20 Способ расчета результатов фотометрии по стандартным растворам

Лек

Слайд 21 Способ расчета результатов фотометрии по калибровочному графику

Лек

Слайд 22 Правила построения калибровочного графика

Лек

Слайд 23 Способ расчета результатов фотометрии по коэффициентам пересчета

Лек

Слайд 24 Методы оценки результатов фотометрии

1) по конечной точке (измерение в конечной точке) - учет образования продукта за некоторое время инкубации. Расчет результатов по стандарту.

2) по фиксированному времени - требуется применение фотометров с термостатируемыми кюветами. Устанавливается количество нарабатываемого (расходуемого) продукта за определенный промежуток времени, расчет концентрации по стандарту.

3) кинетически (кинетическое измерение) - производят измерение оптической плотности через определенные интервалы времени. Используется для ферментативных методов.

Слайд 25 Особенности эксплуатации фотометрической аппаратуры

Лек

Слайд 26 Основные источники ошибок при фотометрии

Лек

Слайд 27 Рефрактометрия

Метод основан на измерении показателя преломления света при прохождении его через оптически неоднородные среды.

Пример – определение общего белка в сыворотке. В лаборатории используется мало.

Слайд 28 Поляриметрия

Основан на способности веществ в растворе изменять плоскость поляризованного луча света.

Рис. 1 с. 30 –Кам

Пример – лазерный поляриметр для определения глюкозы в моче. В КЛД применяется мало.