11

Лекция №

Тема: Особенности преаналитического этапа при исследовании липидного обмена

ВЗЯТИЕ, УСЛОВИЯ ХРАНЕНИЯ И ДОСТАВКИ МАТЕРИАЛА ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. АПОЛИПОПРОТЕИНА А1 (АПО А1)

Материал для исследования. Сыворотка или плазма крови.

Взятие. Медсестра.

Время взятия и доставки в лабораторию. До 10 ч утра. Немедленно после взятия.

Подготовка пациента. Натощак, не менее, чем через 12—14 ч после приема пищи, исключение алкоголя.

Методика взятия. См. "Методика взятия венозной крови", "Методика получения сыворотки крови", "Методика получения плазмы крови". Кровь берут из вены в пробирку с ЭДТУК. На 1 определение требуется от 10 до 30 мкл сыворотки или плазмы, разведенной в 15 раз (в зависимости от метода).

Условия доставки и хранения. При комнатной температуре сыворотка и плазма могут храниться не более 1 дня, в холодильнике при 4—8 °С — в течение 3 дней. ПРОБЫ НЕ ЗАМОРАЖИВАТЬ!

Примечания. Переход пациента в положение лежа вызывает снижение апо А1 в сыворотке крови на 7—12%, при переходе в вертикальное положение концентрация его возвращается к исходному уровню через 20—40 мин. У курящих мужчин и женщин в среднем на 10% концентрация апо А1 ниже, чем у некурящих. Значительное снижение апо А1 наблюдается у пациентов с превышением массы тела более чем на 120%, ожирении у старых женщин, при потере веса у женщин с ожирением на 47%, через 2 недели после овариэктомии. У новорожденных с малым и очень малым весом концентрация апо А1 на 20,7% и 15,6% ниже, чем у новорожденных с нормальным весом.

Внутрииндивидуальная вариация апо А1 4,7—15,5%, межиндивидуальная — от 8,8 до 36,8%.

• Снижение концентрации апо А1 в сыворотке вызывают следующие лекарства: препараты низкомолекулярных форм гепарина, безафибрат, фенофибрат, каптоприл, метформин, атенолол, метопролол, медороксипрогестерон, норэтидрон, некоторые оральные контрацептивы: например, левоновогестрел в сочетании с прогестином.

• Увеличение концентрации апо А1 вызывают: прием алкоголя 30—60 г в день, физические тренировки. В течение беременности у женщин наблюдается прогрессирующее увеличение апо А1 к моменту родов. В послеродовый период у родильниц концентрация апо А1 повышена в течение 1 недели.

• Увеличение концентрации апо А1 в сыворотке крови вызывал прием следующих лекарств: аминоглютетимида, беклобрата, ципрофибрата, клофибрата и его аналогов, холестирамина, цилазаприла, колестинола, эптастина, метилклотиазида, бендрофлуметиазида. Эстрогены и некоторые оральные контрацептивы: этинидилэстрадиол с этинодиолом, левоноргестрелем и норэтиндроном; фенобарбитал, ниацин, фенитоин, правастатин также увеличивают концентрацию апо А1 (Young D., 1993, 1995).

2. Аполипопротеин в (апо в)

Материал для исследования. Сыворотка, плазма крови.

Взятие. Медсестра.

Время взятия и доставки в лабораторию. Немедленно после взятия. До 10 ч утра.

Подготовка пациента. Натощак, не менее, чем через 12—14 ч после приема пищи, исключение алкоголя и физической нагрузки.

Методика взятия. См. "Методика взятия венозной крови", "Методика получения сыворотки крови", "Методика получения плазмы крови". Кровь берут в чистую сухую пробирку с ЭДТУК. На 1 определение требуется от 10 до 30 мкл сыворотки или плазмы, разведенной в 50 раз (в зависимости от метода определения).

Условия доставки и хранения. При комнатной температуре сыворотка и плазма могут храниться не более 1 дня, в холодильнике при 4—8 °С - в течение 3 дней. Пробы не замораживать.

Примечания. Переход пациента в положение лежа из положения стоя вызывает снижение концентрации апо В на 7—12% и возвращение ее к исходному уровню через 20—40 мин. Голодание снижает апо В на 20% в плазме (400 ккал/день); внутривенное введение алкоголя, прерывание приема алкоголя, бег на дальние дистанции, потеря веса у больных ожирением также снижают концентрацию апо В, так же, как и следующие лекарства: беклобрат, безафибрат, ципрофибрат, фенофибрат, каптоприл, холестирамин, колестипол, энпростил, интерферон, кетансерин, левотироксин, низкомолекулярные препараты гепарина, ловастатин, медроксипрогестерон, ниацин, фенобарбитал, фенитоин, нифедипин, пробуксол, псиллиум, гемфиброзил (Young D., 1993, 1995).

Замораживание при –70 °С с добавлением или без добавления антипротеолитических и антиоксидантных агентов вызывает снижение апо В на 68%, лиофилизация снижает еще на 26% по сравнению с замораживанием.

Увеличение концентрации апо В в сыворотке крови вызывает прием / алкоголя в дозе 60 г в день прием более 3 чашек кофе, в том числе и декофеинизированного. В мутных (хилезных) сыворотках при использовании иммунотурбидиметрии исключение ложного завышения результатов за счет триглицеридов достигается добавлением Твин 20 (2 г/л).

Следующие лекарственные препараты вызывают увеличение концентрации апо В в сыворотке: бета-блокаторы (атенолол, станозолол, тетратолол), катехоламины, циклоспорин А, этретинат, амиодарон, бендрофлуметиазид, фуросемид, метиклотиазид, оральные контрацептивы, в том числе и левоноргестрел.

Средняя суточная биологическая вариация апо В в сыворотке составляет 6,5%. Внутрииндивидуальная вариация от 7,3 до 12,19%. Межиндивидуальная вариация 6,6—25,1%.

3. Холестерин (общий)

Материал для исследования. Кровь капиллярная или венозная, сыворотка или плазма крови.

Взятие. Медсестра или лаборант (в случае определения холестерина в капиллярной крови или в плазме из капиллярной крови).

Время взятия и доставки в лабораторию. До 10 ч утра. При определении на тест-полосках с помощью различных анализаторов (Reflotron фирмы F. Hoffman-La Roche Ltd; Cholestech фирмы Hayward, США и др.) свежая капиллярная или венозная кровь должны быть использована в течение 2—3 мин.

Подготовка пациента. Кровь берется натощак, после 12—14-часового голодания. Перед взятием крови больной должен 15 мин посидеть в покое. Исключить из диеты сахар. Воздержание от приема алкоголя в течение 24 ч. За неделю до взятия крови из диеты следует исключить жиры, за 2 недели — препараты, снижающие уровень липидов.

Методика взятия. См. "Методика взятия капиллярной крови ", "Методика взятия венозной крови", "Методика получения сыворотки крови", "Методика получения плазмы крови". Влияние антикоагулянтов см. "Примечания". При сжатии сосудов (взятие крови из вены) более 1 мин концентрация холестерина увеличивается (Einer G., Zawta В., 1991). Кровь берется в чистую, сухую пробирку или капилляр, в случае получения плазмы используют в качестве антикоагулянтов гепарин и его соли или ЭДТУК и ее соли. На 1 анализ в зависимости от метода требуется 0,005-0,1 мл сыворотки или плазмы. В лабораторию доставляют 2 мл сыворотки или 4 мл крови.

Условия доставки и хранения. При хранении цельной крови при комнатной температуре наблюдается увеличение результатов. Гепаринизированная кровь или кровь с ЭДТУК могут храниться в закрытых сосудах при комнатной температуре в течение 8 ч в случае определения методом "сухой химии". Перед использованием такой крови для исследования общего холестерина на тест-полосках на анализаторах типа Reflotron, пробу нужно встряхнуть для однородного распределения клеток. После отделения (не позднее, чем через 2 ч) сгустка и клеточных элементов сыворотку и плазму можно хранить в закрытом сосуде при комнатной температуре и в холодильнике при 4-8°С в течение 7 дней, при температуре -20°С в течение 3 мес, при –70 °С - в течение многих лет (Тиц Н., 1997; Guder W. и соавт., 1996). Цельную кровь замораживать нельзя. Повторное оттаивание и замораживание сыворотки или плазмы не допускается.

Примечания. Суточная биологическая вариация холестерина в плазме составляет 2,4%, вариация концентрации холестерина изо дня в день - ±35%. Внутрииндивидуальная вариация от 4,2 до 11,8%, межиндивидуальная - 11,0-27,6%. На концентрацию холестерина оказывает влияние положение тела пациента до и во время взятия крови. Например, нахождение в положении сидя в течение 20 мин после перехода из вертикального положения вызывает снижение холестерина. Через 20 мин после перехода из положения сидя в вертикальное положение концентрация возвращается к исходному уровню. Вегетарианская диета, диета, богатая углеводами и жирами, полиненасыщенными жирными кислотами, специальное питание перед хирургическими вмешательствами, диета, богатая отрубями, физические тренировки, потеря веса у больных ожирением, бессонница, овуляция вызывают снижение концентрации холестерина. В летнее время концентрация холестерина в сыворотке и плазме ниже, чем зимой и поздней осенью, у мужчин - ниже, чем у женщин того же возраста, у стариков после 80 лет, в первые 8-12 недель беременности наблюдается снижение холестерина. Снижение вызывают эстрогены и их конъюгаты у женщин в постменопаузальном периоде, леводопа, холестирамин, нереабсорбируемые аминогликозидные антибиотики (неомицин, стрептомицин, канамицин, гентамицин).

Высокие концентрации билирубина, гемолиз, липемия и мутность проб вызывают завышение концентрации холестерина, если не использовать экстракцию. Гемоглобин завышает результаты в ферментативном методе и методе Златкис—Зака. Прием алкоголя внутрь в больших дозах, кофе, курение, психологические стрессы, диета, содержащая фруктозу и большое количество жиров, вызывают повышение концентрации холестерина. В фолликулиновую фазу менструального цикла концентрация холестерина выше, чем в лютеиновую, значительное увеличение наблюдается непосредственно перед менструацией, во II и III триместрах беременности. В сыворотке крови концентрация холестерина выше, чем в плазме: это зависит от антикоагулянтов, используемых для получения плазмы. При использовании солей ЭДТУК величины холестерина в сыворотке на 3% более высокие, чем в плазме, оксалатов — на 9%, цитратов — на 14%, фторида стабилизатора — на 18% (Wiebe D., Artiss I., 1994). Декстран, иодиды, иодаты, липохром, метатрексат, цефатоксим, амфотерицин В, хлорпромазин, дигитонин, флуозил-DA, тиоурацил, виомицин, витамин D, фенитоин вызывают завышение результатов при определении холестерина методами Либермана—Бурхарда и Златкис—Зака, тетрациклин — при применении; холестеролоксидазных методов. Повышенные результаты характерны при применении следующих лекарственных препаратов: кортикотропин, анаболические стероиды, андрогены, тиазидовые диуретики, сульфаниламиды, фенотиазин, имипрамин, хенодеоксихолевая кислота, клофибрат, клонидин, циклоспорин А, дисульфирам, этиловый эфир, глютетимид, ибупрофен, изотретиноин, левартеренол, преднизолон, преднизон, прохлорперазин, бета-блокаторы, спиронолактон, препараты лития, мепробамат, оральные контрацептивы, кортизон, циклофосфамид (Young D., 1995).