1. Принципы и методические особенности иммунохимических методов анализа – 15 мин

Иммунохимические методы исследований – методы, основанные на специфической реакции взаимодействия антигена с антителом.

Cфера применения. - показаны в ситуациях, когда необходимо количественно определить концентрации химических веществ, содержащихся в очень низких концентрациях в биологическом материале.

Специфичность и чувствительность иммунохимических методов

Специфичность: иммунохимические методы высокоспецифичны (95-98%), можно легко и точно дифференцировать в биологической пробе химические вещества, имеющие очень схожую молекулярную структуру (например, Тироксин и Трийодтиронин).

Чувствительность: При помощи иммунологических методов исследования в биологической пробе можно определить химические вещества в концентрациях вплоть до 10 ^{- 23} моль/л.

Принцип иммунологических методов исследования

Основа технологии любого иммунологического метода исследования – реакция между антигеном и антителом.

Антиген - вещество, распознающееся иммунной системой

Антитела (иммуноглобулины) - белки, специфически реагирующие с Аг.

Антиген подходит к определенному антителу как «ключ к замку».

• ТРИ ФУНДАМЕНТАЛЬНЫХ ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ПРИНЦИПА ИММУНОХИМИ-ЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ:

А) Гомогенные иммунохимические методы.

В этих методах:

Проба и реагенты перемешиваются,а детекция сигнала регистрируется согласно используемой измерительной технике. В связи с тем, что технология гомогенного иммуноанализа не предусматривает использование твёрдой фазы, методы на её основе получили название “гомогенных”.В связи с тем, что в процессе выполнения тестов, основанных на технологии гомогенного иммуноанализа отсутствуют процедуры разделения между несколькими реакционнными стадиями, данные тесты выполняются относительно быстро.

В) Гетерогенные иммунохимические методы.\ Конкурентные тесты.\

В этих методах:

Один реактант антитела фиксирован на твёрдой фазе. В процессе реакции, эти фиксированные антитела связываются с молекулами исследуемого антигена пробы или с реагентом. Избыток реагентов или не связавшихся с фиксированными антителами антигенов пробы, удаляются из реакционной смеси в процессе стадии промывки, после которой детектируется меченный реагент связанный с фиксированными на твёрдой фазе антителами. Следует отметить, что благодаря стадии промывки разделения связанных свободных аналитов представляется возможность устранить влияние на процесс исследования других компонентов, содержащихся в исследуёмой пробе. Таким образом, гетерогенные иммунохимические методы исследования позволяют определять химические вещества, присутствующие в пробах пациентов в очень низких концентрациях. Технологические приёмы, используёмые при постановке различных тестов, в основе которых лежит технология гетерогенного иммунохимического анализа различны.

С) Иммунохимические методы на основе диффузии и электрофореза (Радиальная иммунодиффузия.).

В процессе иммунодифузии, растворённый антиген и растворённое антитело взаимодействуя между собой образуют преципитат,детекцию которого можно производить либо визуально, либо при помощи специальной измерительной аппаратуры. При этом следует отметить, что здесь очень большое значение имеет точность в соотношении концентраций между антигенами и антителами. Реакция иммунопреципитации может происходить не только в жидкостях, но и в гелях. Пассивная иммунодифузия антигена и антитела может быть активизированна при помощи различных электрофоретических методик.