Определение количества сперматозоидов в 1 мл и во всем эякуляте

Подсчет обездвиженных сперматозоидов осуществляется в камере Горяева.

Эякулят после перемешивания разводят в 20 раз раствором для обездвиживания сперматозоидов в пробирке. Сперму набирают в пипетку от гемометра Сали до метки и вводят в 0,4 мл разводящей жидкости. Тщательно перемешивают и заполняю заранее подготовленную счетную камеру Горяева так же, как для подсчета форменных элементов крови. Через несколько минут производят подсчет сперматозоидов в пяти больших разграфленных квадратах, расположенных по диагонали при увеличении; окуляр 7, объектив 40 с опущенным конденсором. Подсчитывают только те сперматозоиды, головки которых лежат внутри квадратов. Полученное число умножают на 106, в результате получают количество сперматозоидов в 1 мл эякулята, а затем умножают на объем эякулята и получают общее количество сперматозоидов. В норме в 1 мл спермы содержится 60—120 х 106 сперматозоидов, во всем эякуляте количество сперматозоидов превышает 120 х 106, в среднем 150—450 х 106.

Определение числа неподвижных сперматозоидов в счетной камере

Сперма разводится теплым изотоническим раствором хлорида натрия в 20 раз. Заполняют камеру Горяева и подсчитывают количество неподвижных сперматозоидов так же, как описано выше. Расчет процентного содержания неподвижных сперматозоидов производят следующим образом, исходя из пропорции:

, где а — количество неподвижных сперматозоидов,

б — общее количество сперматозоидов. Результат выражают в процентах.

Пример. Содержание сперматозоидов в 1 мл равно 80 х 106, из них неподвижных 16 х 106. Отсюда количество неподвижных форм = 20%. У здоровых людей неподвижные сперматозоиды составляют 10—20%.

Кннезисграмма — это процентное соотношение сперматозоидов с различной подвижностью. Количество подвижных сперматозоидов является главным критерием при оценке их полноценности. Активноподвижные сперматозоиды обладают быстрым поступательным целесообразным вращательным движением с перемещением в поле зрения. Малоподвижные сперматозоиды двигаются медленно, совершая колебательное, манежное движение или подергивание на месте. Исследование проводят с использованием «окошечка Фонио» для ограничения поля зрения. Исследование проводят при температуре 20—25 °С. На сухое предметное стекло наносят каплю перемешанного эякулята, покрывают покровным стеклом, избегая попадания пузырьков воздуха. Подсчитывают в нескольких полях зрения не менее 100 клеток, отмечая количество активноподвижных, малоподвижных и неподвижных. Рассчитывают процентное соотношение сперматозоидов с различной подвижностью.

Для общей визуальной оценки можно использовать шкалу в баллах: 4 — активная подвижность (все сперматозоиды обладают прямолинейной подвижностью со значительной скоростью), 3 — хорошая подвижность (большинство сперматозоидов обладает прямолинейной подвижностью, но она несколько снижена), 2 — посредственная подвижность (небольшое количество двигается поступательно), 1 — плохая подвижность (поступательное движение сперматозоидов отсутствует), 0 — полное отсутствие движения сперматозоидов.

Определение мертвых и живых сперматозоидов: окрашивание по Блуму. На предметное стекло наносят каплю спермы, рядом две капли водного раствора кислого (50 г/л) эозина, капли смешивают, через несколько секунд добавляют каплю водного раствора нигрозина (100 г/л), перемешивают и через несколько секунд делают тонкий мазок при помощи шлифованного стекла. Мазок высушивают и исследуют с помощью иммерсионного объектива. Подсчитывают не менее 200 клеток, выделяя отдельно живые и мертвые сперматозоиды. Мертвые сперматозоиды окрашены в красно-фиолетовый цвет, живые — бесцветные. Можно окрашивать одним эозином без нигрозина, однако при окраске с нигрозином сперматозоиды выглядят более контрастно. В нормальном эякуляте живые сперматозоиды составляют 90—95% от общего количества.

МИКРОСКОПИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ОКРАШЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ

На мазок наносят раствор краски-фиксатора Май — Грюнвальда на 3 мин. Затем препарат ополаскивают водой и заливают на 5—10 мин рабочим раствором краски Романовского, который готовят перед употреблением из расчета 1 капля краски Романевского на 1 мл дистиллированной воды. Препарат промывают проточной водой, высушивают и исследуют с использованием иммерсионной системы. Время окраски может быть изменено в зависимости от качества красителя.

В окрашенном препарате подсчитывают не менее 200 сперматозоидов и выражают в процентах количество нормальных и патологических форм, количество клеток сперматогенеза. Молодые или незрелые формы сперматозоидов имеют вокруг головки и шейки остаток цитоплазмы («воротничок» или «капюшон»), наблюдаются при частых половых сношениях и неспособный к оплодотворению. В норме составляют не более 2%.

Старые формы сперматозоидов с гиперхромией, ахромией, вакуолизацией головки появляются в семенной жидкости после продолжительного полового воздержания и непригодны для оплодотворения. В нормальном эякуляте их не более 4%.

К патологическим формам относят сперматозоиды: макро-, микро-, конические головки, клювовидные, двуглавые с одной шейкой и хвостом, с раздвоенными головками, без шейки, с утолщенной, изогнутой шейкой, с несколькими хвостами, без акросомы или без ядра и др. (рис. 11).

У здоровых мужчин с нормальной спермой патологические Я формы сперматозоидов обычно не встречаются, но их количество при нормоспермии может достигать не более 20%. Среди патологических форм нормального эякулята 10—15% приходится на патологию головки, 2—5% — тела, 2—9% — хвоста. При секреторной форме бесплодия выявляются сперматозоиды с патологией головки и тела. Патология хвоста обычно экскреторного происхождения возникает при прохождении сперматозоида по семявыносящим путям.

Клетки сперматогенеза в нормальной сперме составляют 0,5—2% по отношению к количеству сперматозоидов. Сперматогонии в норме не обнаруживаются, встречаются обычно сперматиды. При бесплодии секреторного типа процент их значительно повышается, появляются более молодые клетки сперматогенеза.

Микроскопическое исследование спермы выявляет следующие состояния: аспермия — отсутствие в сперме сперматозоидов и клеток сперматогенеза; азооспермия — отсутствие сперматозоидов при наличии клеток сперматогенеза; асте-носпермия — характеризуется снижением процента активноподвиж-ных сперматозоидов; олигозооспермия — уменьшение количества сперматозоидов в 1 мл эякулята; тера-тоспермия — увеличение процента патологических форм сперматозоидов; некроспермия — увеличение количества мертвых сперматозоидов; акинезис — состояние, при котором неподвижные сперматозоиды после «оживления» начинают двигаться.

Заключение. Ответы на вопросы- 3 мин

Зав. кафедрой клинической лабораторной диагностики

д.м.н. И.А.Новикова ____________________ /подпись/