3. Абсорбционная фотометрия. Закон Ламберта-Бера. – 10 мин

Абсорбционная фотометрия – метод анализа, основанный на измерении степени ослабления монохроматического светового потока в результате избирательного поглощения света растворенным веществом. Предназначен для измерения концентрации исследуемых веществ по их способности к светопоглощению. Теоретическим обоснованием абсорбционной фотометрии служит закон Ламберта –Бера, солгасно которому логарифм отношений интенсивности светового потока, входящего в раствор, к интенсивности светового потока, выходящего из раствора, прямо пропорционален концентрации вещества и толщине поглащающего слоя. Оптическая плотность раствора обозначается буквой Е и называется экстинцией. В упрощенном виде уравнение можно представить так: Е = К х С, где К – константа, являющаяся произведением коэффициента поглощения на толщину рабочего слоя; С – концентрация вещества. То есть оптическая плотность растворов при прочих равных условиях прямо пропорциональна концентрации вещества. Графическое изображение этого закона практически воплощается в калибровочных графиках. По оси абсцисс – С, по оси ординат – Е.

4. Спектрофотометрия, нефелометрия, атомно-абсорбционная фотометрия, принципы методов.– 20 мин.

Методы абсорбционной фотометрии: а) спектрофотометрия, в) нефелометрия.

Спектрофотометрия (в общем смысле колориметрия) – измерение интенсивности окраски раствора анализируемого вещества относительно интенсивности окраски эталонного раствора. Приборы для выполнения – фотометр и спектрофотометр. В фотометрах нужные спектральные диапазоны выделяются при помощи светофильтров. Поэтому число участков спектра, в котором может проводиться измерение, равно числу светофильтров. В спектрофотометре участки света выделяются с помощью призм или дифракционных решеток, поэтому можно установить любую длину волны в заданном диапазоне. Обычно спектрофотометры – это приборы более высокого класса, в них можно выделить более узкий (монохроматический) участок спектра, однако все зависит от конкретной конструкции прибора.

Нефелометрия – метод анализа, связанный с оценкой степени мутности исследуемого раствора. Мутность возникает в результате взвешивания в растворителе мельчайших твердых частиц вещества, которые рассеивают лучи света, проходящего через раствор. Интенсивность рассеивания света возрастает с увеличением размера и числа рассеивающих частиц. Причем такая закономерность в сильно разбавленных растворах находится в соответствии с основным законом фотометрии, что позволяет определять концентрацию вещества по степени мутности образуемых им растворов.

В зависимости от способа регистрации луча света, проходящего через мутный раствор, нефелометрию делят на 2 метода: а) собственно нефелометрия; б) турбидиметрия.

а) - источник света и приемник света расположены на взаимно-перпендикулярных осях; измеряется интенсивность светового потока, возникшего вследствие рассеяния падающего на взвесь света

б) – источник света и приемник света находятся на одной оси; измеряется ослабление светового потока, прошедшего через мутный раствор.

Все современные фотометры устроены по второму принципу, поэтому все нефелометрические методы в клинике относятся к турбидиметрии (тимоловая проба, определение серомукоидов, бета-липопротеидов и др.)