II. Методы определения групп крови

Группа крови – это сочетание нормальных иммунологических и генетических признаков крови, которое наследственно детерминировано и является биологическим свойством каждого индивидуума.

В клинической практике используют понятие «группа крови по системе АВО».

Группы крови передаются по наследству, формируются на 3-4 месяце внутриутробного развития и остаются неизменными в течение всей жизни. Считается, что у человека группа крови включает несколько десятков антигенов в различных сочетаниях. Этих сочетаний – групп крови - реально может быть несколько миллиардов. Практически они одинаковы лишь у однояйцовых близнецов, имеющих один и тот же генотип.

В практической медицине термин «группа крови», как правило, отражает сочетание эритроцитарных антигенов системы АВО и резус-фактора и соответствующих антител в сыворотке.

Определение групп крови проводят в крови (с консервантом, без консерванта, венозной или капиллярной) методом прямой гемагглютинации на плоскости с помощью стандартных изогемагглютинирующих сывороток, моноклональных антител и перекрестным методом.

Определение группы крови больного в отделении проводится лечащим врачом, врачом, переливаю­щим кровь, либо специально обученной процедурной медсестрой под наблюдением врача в процедурном кабинете при помощи стандартных сывороток двух различных се­рий каждой группы. Для определения групповой принадлежности используют кровь, взятую в количестве 4-5 мл в сухую пробирку.

Результат определения группы крови немедленно вносится:

- на пробирку для лабораторного исследования путем наклеивания марки соответствующей группы крови, на которой указывается номер медицинской карты стационарного больного, фами­лия, инициалы больного и дата взятия крови;

- в направление для лабораторного исследования в клиническую лабораторию, на котором указывается номер медицинской карты, фамилия, имя, отчество больного, дата и др.

- на лицевую сторону медицинской карты с указанием даты исследования, серии сывороток и за подписью лечащего врача.

У больных, реципиентов в донорской крови все первичные и повторные исследования групп крови проводятся при помощи стандартных сывороток двух различных серий каждой груп­пы.

Подтипы антигена А.

Антиген А не является однородным, существует два основных его подтипа: А₁ и А₂. Эритроциты с подтипом агглютиногена А₁ встречаются намного чаще, чем с подтипом А₂ (88% и 12% соответственно). Поэтому при наличии агглютиногена А₁ его обозначают просто А, а обозначение с индексом применяется только для относительно редкого агглютиногена А₂. В соответствии с этим группа А (II) имеет две подгруппы А (II) и А₂ (II), а группа АВ (IV) — АВ (IV) и А₂В (IV).

Агглютиногены А₁ и А₂ отличаются друг от друга по свойствам:

• Подтип А₁ обладает большей адсорбционной возможностью по сравнению с

агглютиногеном А₂, он сильнее адсорбирует агглютинин а из сыворотки, поэтому его

называют сильным, а подтип А₂ — слабым.

• Эритроциты с агглютиногеном А₂ имеют более низкую агглютинабельность.

• Подгруппы с агглютиногенами А₁ и А₂ обладают и различными свойствами сывороток.

Сыворотка подгрупп А₂(II) и А₂В (IV) довольно часто содержит агглютинин, названный

Ландштейнером и Левиным экстраагглютинином а₁, который дает агглютинацию только с эритроцитами А₁ и не дает агглютинации с эритроцитами А₂. В то же время в сыворотке подгрупп А(II) и АВ (IV) довольно редко, но встречается экстраагглютинин а₂, не агглютинирующий с эритроцитами А₁, а дающий агглютинацию с эритроцитами А₂.

Существуют варианты эритроцитов с еще более слабовыраженными агглютинабельными свойствами, что связано с наличием в них подтипов А₃, А₄, А_z и др. Несмотря на то что эти слабые антигены встречаются довольно редко, они имеют определенное клиническое значение.

Для точного определения подтипа антигена А необходимо проведение дополнительной реакции с так называемым анти-А₁ реактивом, изготовленным из семян растения Dolichos biforis, содержащим только анти-А₁ антитела (проводится в серологической лаборатории).

Подтипы антигена В

Групповой антиген В отличается большей однородностью, хотя описаны редкие его варианты: В₂, В₃, В_w и др. Однако существенного клинического значения это не имеет. Применение стандартных высокоактивных сывороток позволяет выявить и эти слабовыраженные агглютиногены группы В.

Антиген О и субстанция Н

Позже в первой группе крови 0 (I) была найдена специфическая субстанция, также обозначенная символом «О». Фактор О является агглютиногеном, присущим эритроцитам групп 0 (I), А₂ (II), А₂В (IV).

Для эритроцитов всех групп характерно наличие субстанции Н, считающейся общим веществом-предшественником. Субстанция Н чаще встречается у лиц с первой группой крови, в других же она содержится в незначительном количестве. У некоторых жителей индийского города Бомбей обнаружена группа, не содержащая агглютиногенов О, А, В, Н, но содержащая антитела а, ß, анти-0 и анти-Н. Впоследствии этот редкий тип крови, обнаруженный и у жителей других стран, получил название «тип Бомбей».

Кровяные химеры

В настоящее время известны кровяные химеры, которые обусловлены одновременным пребыванием в организме человека эритроцитов, принадлежащих двум фенотипам АВО. В естественных условиях кровяной химеризм встречается у близнецов. Он может также появиться при пересадке аллогенного костного мозга, переливании массивных объемов крови. При определении группы крови и резус-принадлежности в условиях кровяного химеризма, как правило, получают искаженный результат.

Определение группы крови стандартными изогемагглютинирующими сыворотками

1. Специальное оснащение:

- стандартные изогемагглютинирующие сыворотки групп Оaß(I), Аß(II), Ва(III) и АВо(IV), титр

не менее 1:32; - 2 серии;

- изотонический 0,9% раствор хлорида натрия;

- белые фарфоровые или любые другие белые планшеты со смачиваемой поверхностью;

- пипетки, маркированные для каждой группы сыворотки;

- стеклянные, пластмассовые палочки или другой материал для перемешивания капель

крови и сыворотки каждой группы в отдельности;

- песочные часы на 5 мин. (таймер с сигналом);

- цветные марки с указанием группы крови; штативы для пробирок;

- пробирки 10x100 мм;

- специальные штативы для стандартных сывороток или реагентов.

2. Техника определения группы крови при помощи стандартных сывороток.

- Определение группы крови производят в помещении с хорошим освещением при темпе­ратуре +15 -+25°С.

- На пластине для определения группы крови с левой стороны надписывают Оаß (анти-А+В), в середине - Аß (анти-В) и справа - Ва (анти-А), на верхнем крае - фамилию и инициалы лица, у которого определяют группу крови.

- Под соответствующим обозначением группы крови на пластинку наносят по одной боль­шой капле (0,1 мл) стандартных сывороток соответствующих групп 2-х серий для исключения ложного результата. Всего получается 6 капель, которые образуют два ряда по три капли в следующем порядке слева направо: Оаß (анти-А+В), Аß (анти-В) и Ва (анти-А).

- Рядом с каждой каплей сыворотки наносят маленькую каплю (0,01 мл) исследуемой крови, соблюдая соотношение 10:1.

- Смешивают каплю сыворотки с каплей крови индивидуальной чистой стеклянной палоч­кой

- После размешивания капель пластинку покачивают, затем на 1-2 минуты оставляют в покое и снова периодически покачивают.

- Наблюдение за ходом реакции проводится в течение 5 минут. Агглютинация начинается в течение первых 10-30 секунд, однако наблюдение следует вести, до 5 минут, ввиду возможности более поздней агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В.

- На 3-ей минуте в капли смеси сыворотки с эритроцитами, в которых наступила агглюти­нация, добавляют по одной капле (0,05 мл) изотонического раствора хлорида натрия и продол­жают наблюдение при периодическом покачивании пластинки до истечения 5-ти минут.

Оценка результата: реакция в каждой капле может быть положительной (наличие пескообразной или лепестковой агглюти­нации эритроцитов) или отрицательной (отсутствие агглютинации).

Различные сочетания положительных и отрицательных результатов дают возможность судить о групповой принадлежности исследуемой крови (Схема 1).

Схема 1

Результат реакции крови пациента с изогемагглютинирующими сыворотками				Исследуемая кровь принадлежит к группе
Оaß (I) анти-(А+В)	Аß(II) (анти-В)	Вa (III) (анти-А)	АВо(IV) контроль
-	-	-		0(I)
+	-	+		А(II)
+	+	-		В(III)
+	+	+	-	АВ(IV)

Равномерным красным окрашиванием обозначено отсутствие агглютинации, розовое окрашивание с включениями (агглютинатами) - агглютинация.

Как видно из приведенной схемы, результат оценивается в зависимости от реакции исследуемых эритроцитов со стандартными сыворотками группы Оaß (анти-А+В), Аß (анти-В), Вa (анти-А). В тех случаях, когда положительный результат (агглютинация) получен с сывороткой всех трех групп, для исключе­ния неспецифической агглютинации производится контрольное исследование со стандартной сывороткой группы АВо(IV), не содержащей групповых агглютининов. Лишь отсутствие агглюти­нации в этой контрольной пробе позволяет учесть положительный результат с сыворотками групп Оaß (анти-А+В), Аß (анти-В), Вa (анти-А) как истинный, т.е. принадлежность исследуе­мой крови к группе АВ(IV). При наличии панагглютинации, т.е. агглютинации со всеми сыворот­ками и, соответственно, невозможности определить групповую принадлежность по системе АВО, кровь больного подлежит обязательному направлению на СПК или в ОПК для исследования специалистом-изосерологом.