Определение времени свертывания капиллярной крови по методу Сухарева.

Принцип. Определяется скорость образования сгустка капиллярной крови в капилляре Панченкова. Выполнять тест необходимо в капиллярах с одинаковым диаметром, предназначенных только для данного исследования.

Ход определения. В сухой капилляр после удаления первой капли набирают кровь из пальца самотеком до метки 30—40 мм, одновременно включают секундомер и наклоном капилляра переводят столбик крови в середину. Зажав капилляр в руке, покачивают его с интервалом 15 с, смещение крови указывает, что свертывание не наступило. Замедление движения крови и появление на внутренней поверхности капилляра следов крови (начало выпадения нитей фибрина) свидетельствует о начале времени свертывания крови (отмечают время по секундомеру). Прекращение движения крови наступает в момент полного свертывания крови, выключают секундомер и отмечают конец свертывания.

Норма. Начало свертывания крови возникает через 30 с -2 мин, конец свертывания — через 3-5 мин.

Клинико-диагностическое значение. Начало времени свертывания крови удлиняется при нарушении процесса свертывания в первой фазе (дефицит плазменных факторов внутреннего механизма образования протромбиназы). Замедление процесса свертывания более 5 мин наблюдается при гипо- и афибриногенемиях, высокой активности фибринолиза, гипергепаринемии.

Определение активированного частично тромбопластинового времени (ачтв).

Тест называют также каолин-кефалиновым временем, или активированным парциальным тромбопластиновым временем (АПТВ).

Принцип. Определяется время образования сгустка после добавления к плазме кефалина (стандартизация фосфолипидной активации) и каолина (стандартизация активации XII фактора.

Ход определения. В пробирку набирают 0,1 мл плазмы, добавляют 0,1 мл суспензии каолина (0,5 г порошка белой глины на 100 мл физиологического раствора) и 0,1 мл кефалина либо эритрофосфатида (приготовленного согласно инструкции), ставят в ТПС при 37 °С, прогревают 2 мин, затем добавляют 0,1 мл 0,025 моль/л хлорида кальция и отмечают время образования сгустка. Тест выполняется в параллельных пробах.

Норма. АПТВ равна 35—45 с. (в зависимости от набора реактивов в клинико-диагностической лаборатории)

Клинико-диагностическое значение. АПТВ является основным тестом, оценивающим внутренний путь активации процесса свертывания крови. Увеличение теста более 50 с свидетельствует о гипокоагуляции и наклонности к кровоточивости. Этот показатель зависит от количества в плазме факторов II, V, VIII, IX, X, XI, XII, фибриногена и удлиняется при их дефиците; чувствителен к избытку в плазме антикоагулянтов. Этот тест — один из основных для контроля лечения гепарином. У больных, получающих гепаринотерапию, АПТВ удлиняется в 1,5—2,5 раза, что свидетельствует об эффективности лечения. Укорочение теста менее 30 с указывает на гиперкоагуляцию и склонность к тромбообразованию.

Определение протромбинового времени.

Принцип. Определяется время свертывания плазмы при добавлении к ней избытка тромбопластина и оптимального количества хлорида кальция.

Метод Квика.

Ход определения. В пробирку вносят 0,1 мл плазмы, полученной из венозной крови. Прогревают ее в ТПС при 37 °С в течение 60 с, затем добавляют 0,2 мл тромбопластин-кальциевой смеси (равные количества тромбопластина и 0,025 моль/л хлорида кальция), прогретой до 37 °С и немедленно включают секундомер. Отмечают время образования сгустка. Опыт повторяют 2—3 раза и вычисляют среднее значение. Протромбиновое время (ПВ) выражают в секундах (величина ПВ зависит от активности и качества тромбопластина) либо вычисляют протромбиновый индекс (ПИ) по формуле: ПИ = А/Б, где А - протромбиновое время донора (определяют каждый раз с новой серией тромбопластина); В - протромбиновое время пациента.

Метод Туголукова.

Ход определения. В один капилляр Панченкова набирают 3,8% раствор цитрата натрия, выдувают в пробирку, затем сюда вносят четыре капилляра крови. Перемешивают и центрифугируют 7— 10 мин при 1500 об/мин. Полученную плазму разводят физиологическим раствором в соотношении 1:1. Отбирают 0,1 мл этой плазмы, добавляют 0,1 мл тромбопластина, прогревают 60 с в ТПС при 37 °С, затем добавляют 0,2 мл 0,025 моль/л хлорида кальция, прогретого до 37 °С, и немедленно включают секундомер. Отмечают время образования сгустка. Протромбиновый индекс вычисляют по выше приведенной формуле.

Норма. ПИ равна 0,7—1,1.

Метод Лемана.

Ход определения. Кровь берут из пальца. В микропипетку емкостью 0,2 мл набирают 0,04 мл 3,8% раствора цитрата натрия, затем 0,16 мл свободно вытекающей крови. Выдувают в пробирку и перемешивают. Переносят 0,1 мл крови в другую пробирку, обе пробирки ставят в ТПС и прогревают при 37 °С в течение 60 с. Затем в одну из пробирок вносят 0,2 мл тромбопластин-кальциевой смеси (равные количества тромбопластина и 0,045 моль/л хлорида кальция), прогретой до 37 °С, и немедленно включают секундомер. Отмечают время свертывания крови. Тест повторяют с другой пробиркой. Вычисляют протромбиновый индекс (ПИ).

Клинико-диагностическое значение. Протромбиновое время зависит от содержания I, II, V, VII, X факторов и характеризует вторую фазу свертывания крови - фазу образования тромбина. ПВ используют для диагностики тромбоэмболических и геморрагических состояний, для контроля за лечением антикоагулянтами непрямого действия. При заболеваниях печени, гиповитаминозе К в организме, закупорке желчевыводящих путей содержание протромбина снижается, что выражается удлинением протромбинового времени и снижением протромбинового индекса. Укорочение ПВ и увеличение ПИ отмечается у больных с атеросклерозом, артериальной гипертензией, ишемической болезнью сердца, при тромбофлебитах и др.