Принципы диагностики вирусных инфекций

С целью лабораторной диагностики вирусных инфекций используют 3 группы методов:

1. Быстрые (экспресс) методы - прямое обнаружение возбудителя в клиническом материале (от больного).

2. Вирусологический метод - выделение вируса из клинического материала и его идентификация.

3. Серологический метод - определение прироста (динамики) антител к вирусу (за определенный период заболевания) в парных сыворотках больного.

Выбор метода зависит от биологических свойств вируса, периода заболевания, а также технической оснащенности лаборатории.

Экспресс диагностика основана на быстром обнаружении и идентификации вируса, его антигенов или включений в биосубстратах (мазки-отпечатки, биоптаты, эпителий осадка, лейкоциты, гистологические срезы, секционный материал).

Используют методы:

а) серологический  - определение вирусного антигена в исследуемом материале с помощью диагностических противовирусных сывороток в экспресс-реакциях: иммунофлуоресценция (ИФ), иммуноферментный анализ (ИФА), радиоиммунный анализ (РИА), встречный иммуноэлектрофорез (ВИЭФ), иммунная электронная микроскопия (ИЭМ), реакция прямой и обратной пассивной гемагглютинации (РПГА, РОПГА), реакция торможения обратной пассивной гемагглютинации (РТПГА);

б) микроскопический метод  - обнаружение элементарных частиц или включений вирусов с помощью световой, люминесцентной или электронной микроскопии;

в) молекулярная гибридизация - гибридизация комплементарных нитей ДНК или РНК (вируса и зонда).

Вирусологическая диагностика основана на культивировании вирусов на чувствительных клеточных системах (культура клеток, куриный эмбрион, лабораторные животные).

Этапы метода:

1. Забор исследуемого материала.

2. Выбор и получение чувствительной тест-системы, определение ее жизнеспособности.

3. Заражение ее по принципу цитотропизма.

4. Индикация (обнаружение) вируса.

5. Идентификация и типирование вируса проводится на основании:

а) определения антигенов вируса в тест-системе с помощью серологических реак-

ций (ИФ, ИФА, РПГА, РТГА, РСК, РН, ВИЭФ и др.);

б) патогистологического исследования органов и тканей, типа ЦПД;

в) клинических симптомов, биологических проб (кератоконъюнктивальная и др.).

Метод относится к ранним высокочувствительным методам исследования.

Недостатки: сложность интерпретации результатов при выделении персистирующих вирусов; техническая сложность.

Серологический метод определяет нарастание титра (прирост антител) за определенный период заболевания в парных сыворотках больных или переболевших людей - с помощью набора вирусных диагностикумов.

Парные сыворотки - две сыворотки, взятые от одного больного в начале заболевания и через 1-4 недели. Серологические реакции (РПГА, РСК, РТГА, РН, ИФА и др.) ставят одновременно с двумя сыворотками для определения и сравнения их титров. Для ранней диагностики заболевания определяют наличие Ig M в одной сыворотке (в непрямой ИФ и ИФА).

Лабораторная диагностика вирусных гепатитов

В настоящее время известны несколько типов вирусных гепатитов:

• гепатит А (гА) (синоним инфекционный гепатит, эпидемический гепатит, болезнь Бот-

кина),

• гепатит В (гВ) (синоним сывороточный гепатит),

• гепатит ни А ни В (синоним гепатит С),

• гепатит дельта (синоним гепатит Д),

• гепатит Е.

I. ГЕПАТИТ А (гА). Лабораторная диагностика гА основывается либо на выявлении самого возбудителя (метод иммунной электронной микроскопии - ИЭМ), его антигенов (ра-диоиммунный, иммуноферментный, иммунофлуоресцентный метод - РИА, ИФА, ИФ) или антител к вирусу гА (РИА, ИФА).

Для ранней диагностики заболевания, а также выявления источников инфекции используется определение антигена вируса гА (Ag B гА) в фекалиях больных, где он появляется за 7-10 дней до клинических симптомов и в первые дни заболевания.

Из определяемых в настоящее время специфических маркеров гА важнейшими являются антитела к вирусу гА класса Ig M, которые появляются в сыворотке крови и слюне уже в начале заболевания и сохраняются в течение 3-6 месяцев. Обнаружение антител к гА класса Ig M однозначно свидетельствует о гепатите А и используется для диагностики заболевания, в том числе и бессимптомных случаев инфекции и выявления источников инфекции в очагах.

Антитела к вирусу гА класса Ig G выявляются с 3-4 недели заболевания и сохраняются длительно, что позволяет оценить состояние иммунитета населения, динамику специфического гуморального иммунитета.

Вирус гепатита А в материале от больного можно выявить методом иммунной электронной микроскопии. В основе метода лежит смешивание суспензии вируса с антисывороткой, отделение иммунных комплексов и исследование их в электронном микроскопе.

II. ГЕПАТИТ В (гВ). В организме людей, зараженных вирусом гВ, с разной частотой и на разных этапах могут выявляться серологические маркеры: поверхностный Hbs Ag и сердцевинные Hbc Ag и Hbe Ag, а также антитела к ним (anti-Hbc, anti-Hbe, anti-Hbs). Динамика их появления представлена на рисунке:

Динамика появления серологических маркеров гВ.

Все антигены и соответствующие им антитела могут служить индикаторами инфекционного процесса.

Наличие Hbs Ag и anti-Hbc класса Ig M свидетельствует об остром периоде инфекции. В период реконвалесценции - это антитела класса Ig G и выявляются они совместно с anti-Hbs, anti-Hbc -антителами. Наличие их является единственным показателем инфекции в прошлом и используется для ретроспективной диагностики Hbc Ag, сопутствующей полноценным вирусным частицам, является прямым показателем активной репродукции вируса и отражает степень инфекциозности. Длительное присутствие Hbe Ag и Hbs Ag в крови - неблагоприятный признак, свидетельствующий о формировании хронического процесса.

При формировании длительного носительства постоянно определяется Hbs Ag. Для обнаружения антигенов и антител используют РПГА, РИА и ИФА. Для обнаружения Hbs Ag широко используется РОПГА - реакция обратной пассивной гемагглютинации с обязательным положительным контролем на Hbs Ag.

III. ГЕПАТИТ С (гС). Вызывается РНК-содержащим вирусом, который относится к Flaviviridae. Вирионы имеют диаметр 30-60 нм, чувствительны к обработке хлороформом. Позитивная одноцепочечная РНК кодирует синтез 3 структурных и 5 неструктурных белков. Гепатит С по клинико-биохимическим признакам сходен с гепатитом В. У 50% инфицированных лиц заболевание переходит в хроническую форму, а у 20% хронических больных развивается цирроз печени. Механизм передачи вируса гепатита С в основном парентеральный. Лабораторная диагностика гС основана на определении антител к вирусу гС методами ИФА или РИА.

VI. ВОЗБУДИТЕЛЬ ГЕПАТИТА ДЕЛЬТА (ГЕПАТИТ Д) - РНК-содержащий, дефектный вирус, способный реплицироваться в организме хозяина лишь при обязательном участии вируса-помощника, роль которого выполняет вирус гВ. Оболочку вируса-дельта формирует Hbs Ag. Присоединение дельта-инфекции к гВ ведет к развитию тяжелых злокачественных форм болезни, хронических форм заболевания с ранним формированием цирроза печени.

Лабораторная диагностика гепатита Д проводится путем обнаружения маркеров вируса гВ и дельта-вирусной инфекции, Hbs Ag, anti-Hbc (Ig M) и дельта Ag. Последние тестируются при помощи ИФА и РИА. Наибольшее диагностическое значение имеют антидельта Ig M, которые обнаруживаются в течение всего заболевания.

V. ГЕПАТИТ Е. Широко распространен в тропических и субтропических странах, распространение заболевания проходит водным путем. Вирион диаметром 27-32 нм содержит однонитчатую РНК, по физико-химическим свойствам схож с вирусами семейства Caliciviridae. Лабораторная диагностика основана на определении АТ в сыворотке крови ИФА.