Литература / Санитарная Микробиология

5.Произвести количественную оценку (там, где это возможно) санитарного состояния объекта и исследовать морфологические, тинкториальные свойства микроорганизмов.

6.Сравнить результаты санитарного состояния объекта, полученные разными методами.

Вопросы для самоконтроля

1.Правила исследования разных объектов методом смыва на показатели общей обсемененности, присутствие санитарнопоказательной микрофлоры (какой?).

2.Сущность метода «отпечатка» при определении санитарного состояния объектов окружающей среды. Достоинства и недостатки метода.

3.Рассказать о методе агаровой заливки как одном из способов изучения санитарно-микробиологического состояния объекта. В каких случаях можно применять этот метод?

ПРИЛОЖЕНИЕ 1 Таблица 1.1.

Критерии оценки воздуха закрытых помещений

Таблица 1.4. Ориентировочная схема оценки санитарного состояния почвы по

бактериальным показателям*

(*Полученные данные сопоставляются с гельминтологическими и химическими показателями).

Таблица 1.5.

Критерии оценки предметов обихода и оборудования по санитарно-микробиологическим тестам

ПРИЛОЖЕНИЕ 2

Способы приготовления питательных сред

Среда для обнаружения гемолитического стрептококка

(ср.Туржецкого). К расплавленному горячему 2% МПА с 0,5% глюкозы и рН=7,4 прибавляют при постоянном перемешивании 8% дифибринированной крови. Агар (не доводить до кипения!) прогревают на спиртовке и перед разливкой в чашки в него

добавляют к 100 мл среды 0,2 мл 0,1% водного раствора генцианового фиолетового.

Среды для обнаружения БГКП (ОКБ)

(ГПСглюкозопептонная среда). Концентрированная. В 1

л воды растворяют 100 г пептона, 50 г хлорида натрия, 50 г глюкозы, нагревают смесь до кипения, фильтруют, устанавливают рН 7,4-7,6. Нормальной концентрации. Готовят так же, как концентрированную, только количество ингредиентов в 10 раз меньше. Стерилизуют при 1120С 12 мин (во флаконах). При остывании в среду добавляют индикатор Андреде.

Среда Эндо с молоком. Среду готовят из сухого порошка, но воды берется меньше на 10%, ее заменяют стерильным молоком. К 100 мл среды добавляют 0,2 мл 5%-ного спиртового раствора основного фуксина, 0,2 мл 5%-ного р-ра розоловой кислоты.

Желчно-лактозный бульон с бриллиантовым зеленым. К

700 мл дист.воды добавляют 10 г пептона, 10 г лактозы, 200 мл желчи, 13,3 мл 1%-ного водного раствора бриллиантового зеленого и доливают воду до общего объема 1 л. Разливают в колбы с поплавками. Стерилизуют при 1120С, 12 мин.

ФКП-1. Готовят так же как желчно-лактозный бульон, но лактозы берут 1 г и добавляют 1 г триптофана.

Среда для обнаружения клостридий (ср.Вильсона-Блера).

К 100 мл сахарного (с 1% глюкозы) расплавленного и охлажденного до 600 0С МПА добавляют 5-10 мл 20%-ного р-ра сульфита натрия и 1 мл 8%-ного р-ра хлорида железа, приготовленные на стерильной дист.воде.

Среда для обнаружения стафилококков. (молочно-солевой агар) К 1 л МПБ добавляют 65 г хлорида натрия, 20 г агар-агара. Разливают, стрилизуют при 1200 0С 20 мин. Перед посевом к расплавленному и охлажденному до 450 0С агару добавляют 10%-ного стерильного молока, перемешивают и разливают в чашки Петри.

ПРИЛОЖЕНИЕ 3

Тесты для идентификации патогенных и условно-патогенных микроорганизмов

Стафилококки

Морфологически Staphylococcusграмположительные кокки, располагающиеся в виде характерных «виноградных гроздей». Патогенные стафилококки на кровяном агаре образуют колонии диаметром 2—3 мм, окруженные прозрачной зоной гемолиза; на молочноили желточно-солевом агаре - колонии, окруженные зоной просветления (протеолитическая активность) и радужным венчиком (наличие ферменталецитовителлазы).

Из подозрительных колоний делают высев на скошенный мясопептонный агар для выделения чистой культуры. После 24 ч инкубации при температуре 37°С проверяется

плазмокоагулирующая активность культуры посевом в пробирки с 0,5 мл цитратной плазмы (человеческой или кроличьей) в разведении 1:4. Патогенные стафилококки коагулируют плазму в течение 2—24 ч в условиях термостата. Учет производят через 1, 2, 4 и затем 24 ч по образованию небольшого желеобразного сгустка на дне пробирки. Выделенные стафилококки подвергаются фаготипированию при необходимости установления источника возникновения стафилококковой инфекции и путей распространения.

Стрептококки

Один из представителей - Str.viridans (зеленящий стрептококк) - постоянный непатогенный обитатель зева. На кровяном агаре Streptococcus образуют мелкие (точечные) сероватые колонии с прозрачной зоной гемолиза (β- гемолитические) и колонии с зеленовато-бурым ореолом и повышенной прозрачностью среды (α-зеленящие). На кровяном агаре нередко рост стрептококков подавляется быстрорастущей другой микрофлорой воздуха. Поэтому учет лучше вести на чашках с элективными средами - Гарро и Туржецкого, в которые для подавления сопутствующей флоры добавляется генциан фиолетовый, обладающий бактериостатическими свойствами в

Условные обозначения: +, - положительный (отрицательный) тест наблюдается у 90-100% штаммов; [+][- ]- 76-89% штаммов;

(+) (- )- 25-75% штаммов.

Escherichia coli

Колонии со среды Эндо пересевают в лактозный бульон с борной кислотой или в желчно-лактозную среду с бриллиантовым зеленым, предварительно нагретые до температуры 43-44°С (в водяной бане), и сразу после засева теплые пробирки помещают в термостат при температуре 43°С на 24 ч. Борная кислота и бриллиантовый зеленый, добавляемые в среды, являются ингибиторами сопутствующей флоры. Появление газообразования свидетельствует о присутствии Е. coli в исследуемой воде. Если нет возможности сделать посев в лактозный бульон с борной кислотой, то идентификацию Е. coli проводят по двум признакам: ферментация лактозы при температуре 44,5°С в течение 24 ч и способности образовывать индол. В этом случае подозрительные на Е. coli колонии засевают параллельно в 2 пробирки: одну с полужидкой средой с лактозой, вторую - со средой для определения индола (бульон Хоттингера, пептонная вода или другая среда, содержащая триптофан), под пробку пробирки вставляют индикаторную бумажку на индол и инкубируют при температуре 44,5°С. Посевом в пробирки со средой ФКП-1

идентификация упрощается, так как в этой среде содержатся лактоза и триптофан. Положительный ответ дается при образовании газа (разложение лактозы) и индола (ферментация триптофана).

Тест Грегерсена

Этим тестом можно заменить окраску по Граму. В капле 3%-ного водного раствора КОН на предметном стекле эмульгируют бактерийную массу, взятую с плотной среды. Спустя несколько секунд после перемешивания за петлей тянутся слизистые нити, что указывает на принадлежность исследуемой колонии к грамотрицательному виду. Грам(+) бактерии слизистые нити не образуют.

Каталазный тест

Наносят 1-2 капли 3% перекиси водорода непосредственно на исследуемую колонию. Появление пузырьков свидетельствует о выделении бактериями каталазы.

Оксидазный тест

Тест проводят с колониями микроорганизмов, выросшими на среде Эндо. Часть подозрительных колоний стерильной петлей переносят на фильтровальную бумагу, пропитанную реактивом: диметил-п-енилендиамином и α-нафтолом. Если микроорганизмы, выросшие на фильтре, выделяют оксидазу, цвет колонии через 2—5 мин изменяется на сине-фиолетовый. Такие колонии не учитывают при анализе воды. Можно на фильтровальную бумагу с индикатором накладывать весь фильтр с выросшими на нем колониями. Колонии БГКП темнокрасного цвета не изменяют своей окраски (так как кишечные палочки оксидазоотрицательны) и учитываются как представители фекального загрязнения воды.

В сомнительных случаях - при наличии колоний розовых или бесцветных (лактозоотрицательных), не обладающих оксидазной активностью, дополнительно определяют способность бактерий ферментировать глюкозу при температуре 37° С и проявлять протеолитическую активность на среде Эндо с молоком. Колонии учитывают как БГКП, если они образованы грамоотрицательными палочками, ферментирующими глюкозу до кислоты и газа и не обладающими протеолитической активностью.

Список рекомендуемой литературы

1.Мудрецова-Висс К.А., Кудряшова А.А., Дедюхина В.П. Микробиология, санитария и гигиена: учеб. для вузов. -7-е изд. - М.: ИД «Деловая литература», 2001. – 388 с.

2.Санитарная микробиология / Н.В. Билетова, Р.П. Корнелаева, Л.Г. Кострикина и др. Под ред. С.Я. Любашенко. - М.:Пищ.пр-сть, 1980. – 352 с.

3.Мармузова Л.В. Основы микробиологии, санитарии и гигиены в пищевой промышленности. - М.: ИРПО, Академия, 2000. – 132 с.

4.Фомин Г.С. Вода. Контроль химической, бактериальной и радиационной безопасности по международным стандартам: энциклопедический справочник. - 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Изд-во

«Протектор», 2000. – 848 с.

5.Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии. Под

ред. А.А.Воробьева, Ю.С.Кривошеина. - М.: Мастерство, Высш.шк., 2001. – 224 с.

6.Санитарная микробиология и вирусология / З.Н. Кочемасова, С.А. Ефремова, А.М. Рыбакова - М.: Медицина, 1987. – 352 с.

7.Санитарно-микробиологический анализ питьевой воды: методические указания. - М.: Федеральный центр госсанэпиднадзора Минздрава России, 2001. – 42 с.

8.Определитель бактерий Берджи. В 2-х т.: Пер.с англ. / Под ред. Дж. Хоулта и др. - М.: Мир, 1997.

9.Методы общей бактериологии: В 3-х т.- Пер. с англ. / Под ред. Ф. Герхардта и др. - М.: Мир, 1983.

Подписано в печать 18.12.2006 г. Формат 60х84 1/16. Усл.п.л. 6,04. Тираж 50 экз. Заказ № 288

Издательство ВСГТУ.

670013. г. Улан-Удэ, ул Ключевская, 40, в.

© ВСГТУ, 2006 г.