Биология / Лекции Щербатюк Т.Г / 13. Генная инженерия(самоподготовка)
.pdf
Этапы методов генной инженерии
1.Получение генетического
материала
11
Этапы методов генной инженерии
2. В ДНК, способную реплицироваться автономно (вектор)
ферментативно
встраивают фрагменты ДНК из любого источника
12
Этапы методов генной инженерии
3. Получаемые при этом молекулы гибридной ДНК вводят в E.coli
13
Этапы методов генной инженерии
4. в E.coli рекомбинантные молекулы ДНК реплицируются,
размножая в своем составе
клонируемый фрагмент ДНК
14
Этапы методов генной инженерии
5. Полученные гибридные ДНК подвергают дальнейшим
перестройкам и затем вводят в реципиентные клетки, изменяя их генотип и фенотип
15
Этапы методов генной инженерии
1.Получение генетического материала
2.В ДНК, способную реплицироваться автономно (вектор) ферментативно встраивают фрагменты ДНК
из любого источника
3.Получаемые при этом молекулы гибридной ДНК
вводят в E.coli
4.в E.coli рекомбинантные молекулы ДНК реплицируются, размножая в своем составе клонируемый фрагмент ДНК
5.Полученные гибридные ДНК подвергают дальнейшим перестройкам и затем вводят в реципиентные клетки,
изменяя их генотип и фенотип |
16 |
|
1Э.Получение генетического материала
1. Выделение природных генов с помощью РЕСТРИКТАЗ, которые вызывают гидролиз ДНК с образованием «липких концов»
Выделены из бактерий, названы так, потому что их роль- разрушение чужеродной вирусной ДНК, значит:
ограничение (рестрикция)
развития вирусной инфекции у бактерий
Рестриктазы действуют на ДНК любых организмов, если в ней есть РАСПОЗНАВАЕМЫЕ САЙТЫ (4-6 пар нуклеотидов)=== ПАЛИНДРОМНЫЕ УЧАСТКИ
сейчас в ГИ более 500 рестриктаз, способных разрезать ДНК в 120 местах17
НЕДОСТАТКИ ВЫДЕЛЕНИЯ ГЕНА С ПОМОЩЬЮ РЕСТРИКТАЗ:
1. Не всегда удается подобрать рестриктазы, позволяющие вырезать из ДНК
именно тот участок, в котором содержится интересующий ген.
2. В составе вырезанного |
|
фрагмента ДНК могут |
|
оказаться интроны, |
|
и |
|
рекомбинантные ДНК |
|
не смогут |
|
экспрессироваться |
|
в прокариотической кл-ке, |
|
из-за отсутствия способности |
|
к процессингу и сплайсингу. |
18 |
|
Получение генетического материала
2. химико-ферментативный синтез генов
Секвенированиерасшифровка нуклеотидной последовательности.
Синтезируют короткие (8-16) одноцепочные фрагме
ДНК,
затем их соединяют (с помощью ЛИГАЗ) и
отжигают (дают возможность образоваться 2-х- нитевым молекулам ДНК)
19
Получение генетического материала
3. ферментативный синтез генов
Выделяют иРНК, и на ней, с помощью РЕВЕРТАЗЫ синтезируют нить ДНК
Гены, синтезированные с помощью ревертазы, не имеют
регуляторной части и промотора 
Не могут f-ть в клетках
При переносе в бактерию, к структурным генам + промотор оперона ===
Ген (транскриптон) начинает работать
20