17. Подобрать способ стерилизации:

-пинцетов, скальпеля, шприцов; Шприцы стерилизуют в разобранном виде: отдельно цилиндр и поршень в 2% растворе гидрокарбоната натрия 30 минут. При работе со спороносной микрофлорой стерилизацию производят в автоклаве при 132±2°С (2 атм.) в течение 20 мин, при 126±2°С (1,5 атм.) — 30 мин. -Металлические инструменты (ножницы, скальпели, пинцеты и пр.) стерилизуют в 2% растворе гидрокарбоната натрия, который предупреждает появление ржавчины и потерю остроты. Лезвия скальпелей и ножниц перед погружением в раствор рекомендуется обертывать ватой.

-жидких лекарственных форм; Фильтрование через мелкопористые фильтры — механический способ избавления растворов от нерастворимых образований с малым поперечником частиц, каковыми могут считаться микробные клетки и споры. Государственная фармакопея XI включает этот метод стерилизации для стерилизации термолабильных растворов. Материалом для изготовления фильтров при этом являются такие материалы, как неглазурованный фарфор (керамика), стекло, асбест, пленки, пропитанные коллодием, и другой пористый материал.В данное время используются фильтры различных конструкций, глубинные и мембранные (размеры их пор не превышают 0,3 мкм).

-перевязочного материала. Перевязочный материал и белье стерилизуют автоклавированием при стандартных режимах.

18. Развернутая реакция агглютинации. Для определения AT в сыворотке крови больного ставят развёрнутую реакцию агглютинации ( РА ). Для этого к серии разведений сыворотки крови добавляют диагностикум — взвесь убитых микроорганизмов или частицы с сорбированными Аг. Максимальное разведение, дающее агглютинацию Аг, называют титром сыворотки крови.

19. Оценить результаты реакции связывания комплимента, дать заключение. при соответствии друг другу антигенов и антител они образуют иммунный комплекс, к которому через Fc-фрагмент антител присоединяется комплемент (С), те происходит связывание комплемента комплексом антиген - антитело. Если же комплекс антиген - антитело не образуется, то комплемент остается свободным. PCK проводят в две фазы 1-я фаза - инкубация смеси, содержащей антиген + антитело + комплемент, 2-я фаза (индикаторная) - выявление в смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана, и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к ним. В 1-й фазе реакции при образовании комплекса антиген - антитело происходит связывание им комплемента, и тогда во 2-й фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов не произойдет (реакция положительная). Если антиген и антитело не соответствуют друг другу (в исследуемом образце нет антигена или антитела), комплемент остается свободным и во 2-й фазе присоединится к комплексу эритроцит - антиэритроцитарное антитело, вызывая гемолиз (реакция отрицательная).

20. Метод контроля за качеством стерилизации материала. Контроль эффективности работы стерилизационного оборудования осуществляется физическими, химическими и биологическим (бактериологическим) методами. Надежность этих методов неодинакова. Физические и химические методы предназначены для оперативного контроля и позволяют контролировать соблюдение параметров режимов паровой, газовой, воздушной стерилизации, температуру, давление, экспозицию. Недостаток этих методов заключается в том, что они не могут служить доказательством эффективной стерилизации. Достоверным для определения эффективности является только бактериологический метод.

21. Определить чувствительность бактерий к бактериофагу (по готовым результатам). цельное раневое отделяемое разбавляют физиологическим раствором, гомогенизируют и центрифугируют для осаждения крупных частиц раневого детрита. Затем определяют чувствительность полученного супернатанта к жидкому комбинированному бактериофагу в течение 18-24 часов путем взаимодействия с жидким комбинированным бактериофагом на питательной среде

22. Определить результаты реакции Райта, определить титр антител. Дать заключение. Райта реакция (А. Е. Wright) — серологический метод лабораторной диагностики бруцеллезной инфекции.

Оценка реакции агглютинации в крестах: ++++ полное просветление жидкости при наличии явно выраженного зонтика (при встряхивании зонтик разбивается на хлопья, комочки и крупинки); +++ те же явления, что отмечены для 4 крестов, но жидкость слегка опалесцирует (недостаточно полное просветление); ++ просветление жидкости выражено слабо, имеется наличие зонтика, который при встряхивании разбивается на хлопья, комочки и крупинки; + отсутствие или весьма незначительное просветление при наличии слабо выраженного зонтика или его следов, при встряхивании в жидкости заметны комочки и крупинки; - отрицательная реакция агглютинации. Отсутствие просветления и зонтика. Микробы могут оседать на дно в виде точки, при встряхивании разбиваются в равномерную муть.

7. Диагностически положительной испытуемая проба сыворотки считается при наличии макроскопической агглютинации в разведении 1:50 для свиней, овец, коз и собак и 1 : 100 для крупного рогатого скота, лошадей и верблюдов с оценкой их не менее чем на два креста.

8. Диагностически сомнительной испытуемая проба сыворотки считается при наличии макроскопической агглютинации только в разведении 1 : 25 для свиней, овец, коз, собак и 1 : 50 для крупного рогатого скота, лошадей, верблюдов с оценкой не менее чем на два креста.

9. Все сыворотки, давшие агглютинацию в каких-либо разведениях, исследуются повторно из той же пробы в 4 разведениях: для свиней, овец, коз и собак: 1 :25, 1 :50, 1 : 100, I : 200, для крупного рогатого скота, лошадей, верблюдов: 1 : 50, 1 : 100, 1 : 200, I : 400. При получении сомнительной реакции кровь от животного берется повторно через 3—4 недели.

10. При получении положительных или сомнительных реакций в ответе хозяйству указывается разведение, в котором получена реакция.

23. Учесть результаты титрования бактериофага по Аппельману, дать заключение. 1. Титрованием фага по Аппельману можно определить концентрацию бактериофага в единице объема с точностью до порядка. Для этого используется жидкая питательная среда. а. Фагосодержащий материал десятикратно разводится («титруется») в жидкой питательной среде. б. Каждое разведение засевается чувствительной к данному фагу бактериальной культурой.  в. Посевы инкубируются в термостате. г. Последнее разведение фагосодержащего материала, в котором не будет роста – это и есть титр бактериофага.

24. Реакция иммунофлюорисценции (непрямой вариант). При непрямой модификации окрашивание проводят в два этапа. Сначала на фиксированный мазок с антигеном наносят гомологичную немеченую сыворотку, полученную путем иммунизации кролика данным видом микроорганизма, но не соединенную с флуорохромом. Затем на промытый и высушенный препарат с нелюминесцирующим комплексом антиген-антитело наслаивают люминесцирующую антисыворотку, содержащую антитела против белков сыворотки кролика (например, ослиную антикроличью). После окрашивания препарат вторично промывают, высушивают и микроскопируют под люминесцентным микроскопом.

Опыт работы показал, что непрямой метод люминесцирующих антител по своей специфичности и чувствительности не уступает прямому методу окраски. В то же время непрямая модификация имеет существенное преимущество перед прямым способом, так как требует лишь одной люминесцирующей сыворотки - анти кроличьей, которая выпускается в готовом виде. Видовые сыворотки при этом не метятся флуоресцеином. Недостатками непрямого метода являются некоторое увеличение продолжительности анализа (на 30-40 мин) по сравнению с прямым методом и появление легкого свечения фона препарата вследствие свечения белков сыворотки, адсорбируемых на предметном стекле.

25. Прочитать готовые результаты РГА и РТГА. РГА Агглютинация следует за адсорбцией вируса или его антигена на поверхности нативных или формалинизированных эритроцитов. РГА наступает непосредственно в смеси гемагглютинирующего вируса с эритроцитами. РПГА Реакция пассивной гемагглютинации (Treponema pallidum hemagglutination assay) основана на определении агглютинации эритроцитов,но поверхности которых фиксированы антигены бледной трепонемы,которая происходит только в присутствии антитрепонемных антител.

26. Учесть результаты реакции РПГА. Реакция пассивной гемагглютинации (Treponema pallidum hemagglutination assay) основана на определении агглютинации эритроцитов,но поверхности которых фиксированы антигены бледной трепонемы, которая происходит только в присутствии антитрепонемных антител.

27. Учесть результаты реакции Нобля. Реакция Нобля представляет собой техническую модификацию реакции Видаля, выполняется более просто, но дает результат через 15-20 минут. При ней пользуются небольшими количествами более концентрированных разведений сыворотки и более густой взвесью микробов, которые смешивают, разводят физиологическим раствором и тут же исследуют. Анамнестическая реакция Видаля бывает в том случае, когда агглютинины являются результатом ранее перенесенного заболевания. Прививочная реакция Видаля возникает в результате предшествующей прививки. Групповая реакция Видаля - это такая реакция, когда в одном и том же титре агглютинируются брюшнотифозные и паратифозные микробы. Парадоксальная реакция Видаля показывает более высокое разведение сыворотки при групповой реакции, чем с гомологичным антигеном.

28. Определение некоторых факторов патогенности бактерий: фибринолизина, плазмокоагулазы. Наряду с ферментами, обеспечивающими процессы обмена, патогенные микроорганизмы вырабатывают также ферменты агрессии, которые способствуют преодолению микроорганизмами естественных защитных барьеров макроорганизма и являются факторами патогенности. К таким ферментам, кроме гиалуронидазы и нейраминидазы, относятся дезоксирибонуклеаза, плазмокоагулаза, фибринолизин, гемолизин и пр.

К факторам вирулентности относится и капсула бактерий. Вещества, входящие в состав капсулы, обеспечивают защиту микробов от поглощения их фагоцитами, а следовательно, и от переваривания их внутри фагоцитов. У туберкулезных бактерий защиту от ферментов фагоцитов обеспечивает своеобразный химический состав оболочки микроба. Защищают микробные клетки от фагоцитов и некоторые ферменты, к ним относятся фибринолизин и плазмокоагулаза.

 Плазмокоагулаза.

Принцип метода: В пробирку, содержащую цитратную плазму крови кролика, вносится испытуемая культура. После суточной инкубации в термостате учитываются в динамике результаты. При положительном результате плазма свёртывается (коагулируется) ферментом, несмотря на присутствие антикоагулянта.

Методика: Асептично взятую кровь стабилизируют с помощью 1-4 % цитрата или 0,1 % оксалата натрия. Для получения плазмы цитратную кровь центрифугируют на холоду. Затем плазму разводят (1:3, 1:5) 0,85 % физиологическим раствором и разливают по 0,2-0,3 мл в стерильные пробирки или лунки планшета. Испытуемую культуру вносят пипеткой по 0,1 мл. В каждом опыте должны быть контроли:

- с культурой заведомо патогенных микробов, коагулирующих плазму;

- с культурой непатогенных микробов, не коагулирующих плазму;

- плазма, не засеянная микроорганизмами.

Пробирки (опыт, контроль) ставят в термостат при 37С º на 24 часа. Учёт обязательно проводить через 15 минут, 2, 3, 6 часов и, затем, через 24 часа.

2. Фибринолизин (фибринокиназа). Принцип метода: В пробирку со сгустком фибрина вносят кровь и испытуемую культуру. После инкубации в термостате учитывается результат. При положительном результате сгусток под влиянием бактерий растворяется, кровь приобретает вид свежей.Определение фермента фибринокиназы ведут в крови без цитрата в свёрнутом состоянии подобно выявлению плазмокоагулазы, но с обратным эффектом.