Опыт 2. Определение содержания аскорбиновой кислоты в растениях (по и.К. Мурри)

Метод основан на переведении аскорбиновой кислоты в раствор и на способности ее восстанавливать в кислой среде индикатор синего цвета – 2,6-дихлорфенолиндофенолят натрия – до лейкоформы, при этом аскорбиновая кислота окисляется в дегидроаскорбиновую кислоту. Реакция идет за счет фермента аскорбатоксидазы. Следует отметить, что чем выше содержание аскорбиновой кислоты, тем выше активность фермента аскорбатоксидазы.

Аскорбиновая Дегидроаскорбиновая

кислота кислота

Материалы и оборудование: растительный материал (лук, капуста, яблоки); 1%-й раствор соляной кислоты; 1%-й раствор щавелевой кислоты; 0,001 Н раствор краски Тильманса – 2,6-дихлорфенолиндофенолят натрия; фарфоровая ступка с пестиком; мерная колба на 100 мл; 3 стакана; воронка; бюретка; весы с разновесами; скальпель; стеклянные палочки.

Цель работы: определить содержание аскорбиновой кислоты в растениях.

Ход работы:

1. Берут навеску растительного материала (лук, капуста, яблоки) 5 г и растирают в ступке с 20 мл 1%-го раствора соляной кислоты. Растирание следует вести не более 10 минут.

2. Полученную массу переносят по воронке в мерную колбу на 100 мл с 1%-м раствором щавелевой кислоты. Доводят раствор в колбе до метки щавелевой кислотой. Колбу несколько раз сильно встряхивают и оставляют стоять на 15 минут для осаждения белков.

3. Содержимое колбы отфильтровывают, из фильтрата берут по 10 мл раствора в три стакана, содержимое в стаканах оттитровывают из микробюретки 0,001 Н раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолятом натрия (краска Тильманса) до розовой окраски, которая не исчезает в течение 1 минуты.

Задание: записать результаты титрования всех трех стаканов и вычислить среднее.

Расчет содержания аскорбиновой кислоты производят по формуле:

Х = ;

где X – содержание аскорбиновой кислоты в мг на 100 г вещества;

а – число краски, ушедшей на титрование, мл;

Т – титр краски Тильманса (0,14);

V – объем мерной колбы с экстрактом;

в – число экстракта, взятого для титрования, мл;

с – навеска исследуемого материала, г.

Опыт 3. Влияние динитрофенола на поступление воды в ткань клубня картофеля

2,4-динитрофенол (2,4-ДНФ) является специфическим ядом, который не изменяя или даже усиливая дыхание, разобщает процессы окисления и фосфорилирования в митохондриях. В результате снижается или прекращается новообразование АТФ, что приводит к подавлению процессов, зависящих от энергии дыхания. Нарушается также структура и избирательная проницаемость мембран, для поддержания которой необходима затрата энергии дыхания. Эти изменения приводят к снижению способности клеток поглощать и удерживать воду.

Цель работы: выявить необходимость энергии дыхания для поддержания физиологических функций растительных тканей.

Материалы и оборудование: клубни картофеля, раствор динирофенола (насыщенный), бюксы, нож, весы, фильтровальная бумага.

Ход работы: Из клубня картофеля нарезают ножом 10 пластинок длиной и шириной около 1,5 см и толщиной – 2-3 мм. Разделяют их на две группы, каждую взвешивают и помещают в бюксы. Одну группу пластинок заливают 15 мл водопроводной воды, другую – 15 мл насыщенного раствора динитрофенола и оставляют в открытых бюксах при комнатной температуре на 1,5-2 часа. Затем пластинки вынимают, просушивают фильтровальной бумагой и снова взвешивают.

Результаты опыта записывают в таблицу 2.

Таблица 2

Условия опыта	Масса картофеля, г			Прибавка в массе
	до опыта	после опыта	г.		% исходной массы

Задание: Рассчитывают, сколько проникло воды в пластинки в каждом варианте опыта, и на основании полученных результатов делают выводы о влиянии динитрофенола на поступление воды в ткань клубня картофеля.