Транскрипционный цикл у эукариот Л1-2014 - 11 февраля
.pdf
Структура «открытого комплекса» транскрипции у E. coli
, 12-14 bp
45-50 н/сек
11
Ядро эукариотической клетки
12
Проблемы транскрипции у эукариот
•Отсутствие транскрипции со значительной части генома (не транскрибируется до 70% генома)
•Большое количество ДНК и ее упаковка в нуклеосомы
•Сложная структура промоторов
•Несколько специализированных РНК полимераз
•Процессинг продуктов синтеза
•За распознавание промотора отвечают дополнительные факторы, а не РНК полимеразы.
•Медиатор
13
• все гены высокомолекулярных рРНК
RNAP I |
(80% всей РНК) (14 субъединиц) |
|
• Все мРНК и мяРНК, нкРНК RNAPII • ( 12 субъединиц)
• Гены тРНК, 5S рРНК, нмРНК RNAPIII • (17 субъединиц)
14
Как методически определяют элементы промотора?
Использование тест-систем. Промотор присоединяется к репортерному гену ( например, lacZ, PHO5)
Изменяют границы промотора и изучают влияние на активность репортерного гена
Внесение единичных замен в промотор
Футпринтинг белков, которые взаимодействуют с промотором
15
ДНК-зависимые РНК-полимеразы
Полисубъединичные
ферменты
Односубъединичные
ферменты
РНК-полимеразы эубактерий , архей, эукариотических вирусов
РНК полимеразы эукариот
РНК полимеразы
бактериофагов, T7,
T3, SP6
16
S.cerevisiae :
RPA –гены РНК полимеразы I RPB – гены РНКполимеразы II RPC – гены РНК-полимеразы III
17
РНК полимеразы
Для инициации транскрипции РНК –полимеразам необходимы дополнительные факторы
18
Факторы транскрипции
• консервативен
•Может связываться с ТАТА-box, а также с промоторами без ТАТА-box
•С промотором взаимодействует С- конец ТВР
•Связывается с ДНК в виде мономера
•Связывается с ТАТА со стороны малой бороздки
• Связывание приводит к изгибу ДНК
•TAFs –специфичны для каждой из полимераз
19
РНК полимераза 1 – наиболее специализированная из полимераз
Соотношение РНК:ДНК в S.cerevisiae : 50:1 80% -рРНК, 15%- тРНК, 5% - иРНК.
В клетке 200 000 рибосом Скорость синтеза рибосом 2000 рибосом в минуту
Удрожжей примерно 200 повторов генов рДНК ( Chr.12)
Учеловека – 300 повторов ( Chr. 13,14,15,21,22)
20