Оценка свежести мяса путем микроскопии (гост 23392-78)

Результат микроскопии мазка-отпечатка мяса, окрашенного по Граму

Оценка свежести мяса

1. Микрофлора не обнаружена или в поле зрения менее 10 бактериальных клеток. Следов распада мышечной ткани нет 2. В поле зрения не более 30 бактериальных клеток. Есть признаки распада мышечной ткани (ядра мышечных волокон в состоянии распада, исчерченность волокон слабо различима) 3. В поле зрения более 30 бактериальных клеток. Значительный распад мышечной ткани (почти полное исчезновение ядер и полное исчезновение исчерченности мышечных волокон)

1. Свежее 2. Сомнительной свежести 3. Несвежее

П р и м е ч а н и е. На одном стекле исследуют 25 полей зрения.

Приложение № 10

Сводная таблица основных питательных сред, используемых в санитарной микробиологии

Микроорганизм	Питательные среды
Санитарно-показательные микроорганизмы
БГКП: в воде в почве Кишечные палочки: в пищевых продуктах в молоке Энтерококки Cl. perfringens Нитрифицирующие бактерии Стафилококки Стрептококки в воздухе	ГПС, ЛПС, Эндо, глюкоза с ВР Кесслер, Эндо, глюкоза с ВР КОДА Кесслер, Эндо, Козера Щелочно-полимиксиновая среда, желчная среда, молочно-ингибиторная среда с полимиксином и теллуритом калия или ТТХ Вильсона-Блэра Виноградского Солевой бульон, ЖСА, МСА Кровяной агар
Некоторые патогенные и условно-патогенные микроорганизмы
Сальмонеллы Шигеллы Bacillus cereus	Магниевая среда, висмут-сульфитный агар, селенитовый бульон Селенитовый бульон, Плоскирева Солевой полимиксиновый агар с ТТХ

Приложение № 11

Описание основных питательных сред для обнаружения микроорганизмов в объектах окружающей среды

Среды для обнаружения колиформных палочек (БГКП, ОКБ, ТКБ)

Глюкозо-пептонная среда (ГПС)

1% петонная вода + 0,5% хлорида натрия и 0,5% глюкозы. Индикатор - спиртовой раствор бромтимолового синего или индикатор Андрадэ (кислый фуксин, обесцвеченный NaOH). В концентрированной среде количество всех ингредиентов увеличено в 10 раз. Используется для первичного посева воды. Положительный результат отмечают через сутки по помутнению, образованию кислоты с газом или без него.

Лактозо-пептонная вода (ЛПС)

Аналогична предыдущей среде, только вместо глюкозы берут лактозу.

Глюкоза с ВР

Полужидкий агар с 1% глюкозы. Индикатор ВР - смесь воднорго голубого (В) и розоловой кислоты (Р). Исходный цвет среды розоватый, при подкислении - синий, при подщелачивании - красный или ярко-розовый. Газ обнаруживают по разрывам в столбике агара.

Лактоза с ВР

Аналогична предыдущей среде, но вместо глюкозы 1% лактоза.

Среда ЭНДО

МПА + 1% лактозы + индикатор (основной фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия). Колонии микробов, разлагающих лактозу (эшерихии), красного цвета с металлическим блеском, лактозонегативные (сальмонеллы, шигеллы) - остаются бесцветными.

Среда Козера

Синтетическая среда: в дистиллированной воде растворены фосфат натрия и калия, сернокислый магний и лимоннокислый натрий. В среде растут только цитратпозитивные кишечные палочки, которые могут использовать цитрат в качестве единственного источника углерода.

Среда Кесслер

1% пептонная вода + желчь + лактоза + раствор генцианового фиолетового (с поплавком). Используется для накопления кишечных палочек в материале, содержащем значительную сопутствующую флору, угнетающуюся генциановым фиолетовым и желчью.

Среда КОДА

Питательный бульон + сульфанол + лактоза + бромтимоловый синий. Элективно-дифференциальная среда для колиформных бактерий. Элективный фактор - сульфанол. При росте лактозоположительных колиформных бактерий первоначальный синий цвет меняется на темно-зеленый или ярко-желтый.

Лактозная среда с борной кислотой

Пептонная вода + 0,5% лактозы + борная кислота. Кишечные палочки расщепляют лактозу до кислоты и газа при 43 ⁰С, несмотря на присутствие ингибиторов. Представители родов Enterobacter, Citrobacter и др. на этой среде газ не образуют.

Среды для обнаружения энтерококков

Щелочно-полимиксиновая среда

МПБ + глюкоза + дрожжевой экстракт + антибиотик полимиксин (селективный фактор) + бромтимоловый синий (индикатор). Исходный цвет среды синий, при росте энтерококков - желтый. Дрожжевой экстракт является стимулятором роста энтерококков.

Среды для обнаружения Cl. perfringens.

Среда Вильсона-Блэра

Щелочной МПА + 1% глюкозы + сульфит натрия + хлорид железа. Cl. perfringens образует черные колонии за счет восстановления сернистого натрия, который, соединяясь с хлорным железом, образует черное сернистое железо.

Среды для обнаружения нитрифицирующих бактерий

Среда Виноградского

Синтетическая среда: дистиллированная вода + соли сульфата аммония, двузамещенного фосфата калия, сульфата магния + мел. В присутствии нитрифицирующих бактерий в среде появляются азотная и азотистая кислоты, их обнаруживают по синему окрашиванию при добавлении индикатора дифениламина.

Среды для обнаружения стафилококков

Солевой бульон

МПБ + 9% хлорида натрия. Используется для первичного накопительного посева материала. Высокая концентрация хлорида натрия играет роль элективного фактора.

Желточно-солевой агар (ЖСА, среда Г.Н. Чистовича)

МПА + раствор яичного желтка + 6,5% хлорида натрия, Хлорид натрия - элективный фактор. Около колоний стафилококков, выделяющих фермент лецитовителлазу, образуется зона помутнения за счет продуктов расщепления лецитина, не растворимых в воде.

Среды для обнаружения стрептококков

Кровяной агар

МПА + 3 - 5% дефибринированной крови. По характеру гемолиза можно различить гемолитические («бета»-гемолиз) и зеленящие («альфа»-гемолиз) стрептококки.

Среды для обнаружения некоторых патогенных и условно-патогенных микроорганизмов

Для сальмонелл

Магниевая среда

Пептонная вода + дрожжевой экстракт (стимулятор роста сальмонелл) + водный раствор бриллиантового зеленого + хлорид магния (элективные факторы). Используется для первичного накопительного посева.

Селенитовая среда

Пептонная вода+ лактоза + раствор кислого селенистокислого натрия (ингибитор роста посторонней микрофлоры). Используется для первичного накопительного посева.

Висмут-сульфит агар

МПА + глюкоза + лимоннокислый висмут + сульфат натрия + соль Мора (индикатор на сероводород) + раствор бриллиантового зеленого (ингибитор сопутствующей микрофлоры). Сальмонеллы образуют на этой среде черные колонии. Эшерихии вырастают редко.

Для шигелл

Селенитовая среда (см. выше)

Среда Плоскирева

МПА + лактоза + желчные соли и бриллиантовый зеленый (оба ингибиторы посторонней микрофлоры) + нейтральный красный (индикатор). Колонии шигелл вырастают на этой среде бесцветными, так как не расщепляют лактозу. Колонии лактозопозитивных эшерихий имеют розовый цвет

Для Bacillus cereus

Солевой полимиксиновый агар с ТТХ

МПА + полимиксин + 6% хлорида натрия (элективные факторы) + ТТХ + раствор яичных желтков. Bacillus cereus вырастает на этой среде зернистыми колониями рубинового цвета с неровными краями, окруженными зоной помутнения (за счет лецитовителлазы). Используется для выделения Bacillus cereus при первичном посеве материала.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Борисов, Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология : учебник для вузов / Л.Б. Борисов. – М.: МИА, 2002. - С. 131-136.

2. Поздеев, О.К. Медицинская микробиология : учебник для вузов / под ред. акад. РАМН В.И. Покровского. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. – С. 572-591.

3. Санитарная микробиология : учебно-методическое пособие / под ред. проф. В.П. Иванова. – Л., 1988. – 70 с.

4. Санитарная микробиология : учебно-методическое пособие / А.А. Сазанская, Л.Ю. Бутакова, В.А. Юрова и др. – Барнаул: АГМУ, 2004. – 152 с.