Метод мембранных фильтров.

Используется для определения количества СПМ в материалах, содержащих мало взвешенных веществ, например, для определения ОКБ и ТКБ. Для его осуществления необходимо специальное оборудование, фильтры и фильтрационные установки.

Для санитарно-бактериологических исследований используются особые фильтры, непроницаемые для бактерий (см. таблицу). Перед употреблением фильтры стерилизуются кипячением. Фильтрационная установка состоит из фильтрационного аппарата (фильтр Зейтца и др.) и источника создания вакуума (насос Камовского, водоструйный насос и др.).

Для стерилизации фильтры помещают в воду, предварительно нагретую до 80 ⁰С, а затем нитроцеллюлозные мембранные фильтры подвергают трехкратному кипячению по 10 мин со сменой воды, а мембранные фильтры «Владипор» - однократному кипячению в течение 10 - 15 мин.

Порядок работы:

1. Фильтрационный аппарат стерилизуют фламбированием при помощи смоченного в спирте ватного тампона;

2. Стерильный мембранный фильтр помещают на сетку фильтрационного аппарата стерильным пинцетом и закрепляют устройство;

3. В стакан фильтрационного прибора наливают необходимый объем исследуемого материала или его разведения. При фильтровании небольших объемов жидкости (1 мл) в стакан предварительно наливают 10 мл стерильной воды. Общий объем фильтруемой жидкости не должен быть больше 100 мл. Для больших объемов берут несколько фильтров;

4. Создают вакуум в приемном сосуде;

5. После окончания фильтрации жидкости, выждав некоторое время для удаления излишка влаги, при сохранении вакуума аппарат разбирают и стерильным пинцетом, не переворачивая, переносят фильтр на поверхность плотной питательной среды, избегая появления пузырьков воздуха между фильтром и средой;

6. При наличии в жидкости большого количества взвешенных веществ поверх рабочего фильтра помешают планктонный фильтр. На питательную среду в этом случае переносят оба фильтра;

7. Культивируют посевы 24 ч при 37 ⁰С;

8. Проводят подсчет колоний, типичных для искомого микроорганизма (объем фильтруемой жидкости подбирается с таким расчетом, чтобы на фильтре вырастало не более 30 колоний);

9. Постановка дополнительных тестов для идентификации (определение тинкториальных, морфологических, биохимических свойств). При этом с фильтра исследуется несколько типичных колоний;

10. Выражение результата в виде индекса по формуле:

Индекс = N х 1000/ V,

N - количество колоний, V - профильтрованный объем воды в миллилитрах.

Характеристика отечественных фильтров, используемых в санитарной микробиологии

Вид фильтра и его назначение	Нитроцеллюлозные мембранные фильтры		Фильтрующие мембраны «Владипор» МФА-МА
	№ фильтра	диаметр пор, мкм	№ фильтра	диаметр пор, мкм
Планктонный фильтр при наличии в воде большого количества взвешенных веществ Основной рабочий фильтр, непроницаемый для определяемых микроорганизмов	6 3 2	3,5 0,7 0,5	10 5 6 7 8	0,951-1,050 0,451-0,550 0,551-0,650 0,651-0,750 0,751-0,850

Приложение №4